生物化学实验教程

**篇生物化学实验基础


第1章生物化学实验的基本知识(3)


1.1实验室规范(3)


1.2玻璃仪器(6)


1.3生物化学实验常用仪器(11)

第2章生物化学实验的基本要求(19)


2.1实验样品的制备(19)

2.2实验的准确性与误差(24)

2.3实验记录和实验报告(26)

第3章生物化学基本实验技术(28)


3.1层析技术(28)

3.2电泳技术(36)

3.3离心技术(42)

3.4膜分离技术(49)

3.5光谱学技术(53)

3.6其他生物化学实验技术(62)


第二篇生物化学实验

第4章蛋白质(73)

实验1氨基酸和蛋白质的呈色反应(73)

实验2蛋白质等电点的测定和沉淀反应(77)

实验3血清蛋白盐析及分子筛层析脱盐(79)

实验4蛋白质含量的测定(81)

Ⅰ双缩脲法测定蛋白质含量(81)

Ⅱ考马斯亮蓝结合法(Bradford法)测定蛋白质含量(83)

Ⅲ紫外光吸收法测定蛋白质含量(85)

Ⅳ微量凯氏定氮法测定总蛋白含量(86)

ⅤFolin酚法测定蛋白质含量(88)

实验5氨基酸的分离鉴定(90)

Ⅰ纸层析分离鉴定氨基酸(90)

Ⅱ离子交换层析分离混合氨基酸(91)

实验6血清蛋白的醋酸纤维素薄膜电泳(93)

实验7DNS氨基酸的制备和鉴定(95)

实验8DNP氨基酸的制备和鉴定(98)

实验9用DNS法鉴定蛋白质或多肽的N端氨基酸(100)

实验10SDS聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳分离细菌总蛋白质(102)

实验11SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质的相对分子质量(104)

实验12牛乳中蛋白质的提取与鉴定(108)

实验13大豆蛋白的提取与含量测定(109)

实验14葡聚糖凝胶层析法分离纯化蛋白质(111)

第5章核酸(114)

实验15核酸含量的测定(114)

Ⅰ定磷法定量测定核酸(114)

Ⅱ地衣酚法定量测定RNA(116)

Ⅲ二苯胺法测定DNA含量(117)


实验16过碘酸氧化法定量测定核苷酸(118)

实验17酵母核糖核酸的分离及组分鉴定(121)

实验18菜花(花椰菜)中核酸的分离和鉴定(123)

实验19动物肝脏中DNA的提取(125)

实验20碱裂解法小量提取质粒DNA(127)

实验21DNA琼脂糖凝胶电泳(128)


实验22AMP、ADP和ATP的分离(130)

Ⅰ薄层层析分离AMP、ADP和ATP(130)

Ⅱ醋酸纤维素薄膜电泳鉴定AMP、ADP、ATP(132)

第6章酶学(134)


实验23酶的特性实验(134)

实验24米氏常数测定(135)

Ⅰ脲酶米氏常数的简易测定(135)

Ⅱ过氧化氢酶米氏常数的测定(137)

Ⅲ胰蛋白酶米氏常数的测定(139)

实验25酶活力的测定(140)

Ⅰ液化型淀粉酶活力的测定(140)

Ⅱ薄层层析法鉴定转氨酶活性(142)

Ⅲ分光光度法测定血液中转氨酶的活力(143)

实验26酶的制备(146)

Ⅰ乳酸脱氢酶粗提液的制备及活力测定(146)

Ⅱ枯草杆菌碱性磷酸酶的制备及酶活力的测定(147)

Ⅲ马铃薯多酚氧化酶的制备及性质实验(150)

实验27酶的固定化及对酶活性的影响(152)

实验28琥珀酸脱氢酶竞争性抑制(154)

实验29蔗糖酶相对分子质量的测定(SDSPAGE电泳法)(156)

第7章维生素和辅酶(159)

实验30紫外分光光度法测定鱼肝油中维生素A的含量(159)

实验31食物中脂溶性维生素含量分析(高效液相色谱)(160)

实验32维生素B1的定性测定(163)


实验33维生素B1的含量测定(164)

实验34荧光光度法测定维生素B2的含量(166)

实验35测定维生素C的含量(167)

Ⅰ2，6二氯酚靛酚滴定法测定维生素C的含量(167)

Ⅱ铜离子氧化法测定维生素C的含量(169)

Ⅲ磷钼酸法测定维生素C的含量(170)

实验36辅酶Q10的制备和检测(172)

实验37分离层析仪分离核黄素和血红蛋白(174)

第8章生物能学和物质代谢(177)

实验38丙酮酸含量的测定(分光光度法)(177)

实验39发酵过程中无机磷的利用(178)

实验40肌糖原酵解作用(179)

实验41糖酵解中间产物的鉴定(181)

实验42脂肪酸的β氧化(182)

实验432,6二氯酚靛酚显色反应测定电子传递(184)

实验44乳酸脱氢酶的递氢作用(186)

实验45氨基移换反应(187)

第9章综合性实验(190)

实验46糖的颜色反应(190)

ⅠMolisch反应鉴定醛糖(190)

ⅡSeliwanoff反应鉴定酮糖(191)

ⅢTollen反应鉴定戊糖(192)

实验47血糖含量的测定(193)

ⅠFolinWu法测定血糖含量(193)

ⅡFolinMalmors法测定血糖含量(194)

Ⅲ邻甲苯胺法测定血糖含量(196)

ⅣGODPAP法测定血糖含量(198)

实验48总糖和还原糖含量的测定(199)

Ⅰ蒽酮比色法测定糖的含量(199)

Ⅱ斐林试剂比色法测定糖的含量(201)

Ⅲ3,5二硝基水杨酸比色法测定糖的含量(203)

实验49脂类的测定(206)

Ⅰ索氏抽提法测定粗脂肪含量(206)

Ⅱ脂肪酸的测定(207)

Ⅲ血清甘油三酯简易测定法(208)

Ⅳ醋酸酐法测定血清中胆固醇含量(210)

实验50天然产物中多糖的分离、纯化与鉴定(211)

Ⅰ多糖的提取、纯化(211)

Ⅱ多糖的鉴定(212)

实验51血清蛋白的分离、纯化与鉴定(214)

实验52凝胶层析法分离纯化脲酶(217)

实验53小麦萌发前、后淀粉酶活力的比较(220)

实验54质粒DNA的分离、纯化及鉴定(222)

实验55多聚酶链式反应(PCR)技术扩增目的基因片段(225)

实验56重组质粒DNA的转化(227)

实验57感受态细胞的制备及转化(230)

实验58DNA的酶切分析(231)

实验59植物总黄酮的提取与测定(233)

实验60芦荟中活性成分的提取和纯化(234)

Ⅰ芦荟苷的提取和纯化(234)

Ⅱ高速逆流色谱法分离芦荟苷粗提物(236)

第10章设计性实验(240)

实验61半定量RTPCR检测基因的表达差异(240)

实验62卵磷脂的提取和鉴定(242)

实验63强酸性阳离子交换树脂在废水处理中的应用(244)

实验64转基因植物的PCR鉴定(246)

实验65卵黄高磷蛋白的提取(247)

附录(251)

附录A缓冲液的配制(251)

附录B常用实验数据表(256)

附录C硫酸铵饱和度常用表(261)

附录D层析技术实验数据(262)

参考文献(265)