滑膜调节交叉韧带修复的力学生物学机制研究

第1章 绪论 1.1 问题的提出与研究意义 1.1.1 问题的提出 1.1.2 研究意义 1.2 国内外研究现状 1.2.1 交叉韧带的结构及功能 1.2.2 交叉韧带损伤机理 1.2.3 赖氨酰氧化酶的结构、作用及与骨科疾病的关系 1.2.4 基质金属蛋白酶的结构、作用及与骨科疾病的关系 1.2.5 滑膜在膝关节活动中的重要性 1.2.6 基底形变加载技术的发展 1.3 研究目的和研究内容 1.3.1 研究目的 1.3.2 研究内容 第2章 机械拉伸对膝关节滑膜细胞中LoXs和MMP-1、MMP-2、MMP一3基因表达的影响 2.1 引言 2.2 实验材料、仪器与试剂 2.2.1 实验材料 2.2.2 实验仪器 2.2.3 实验试剂 2.2.4 实验试剂的配制 2.3 实验方法 2.3.1 细胞培养 2.3.2 细胞力学拉伸加载装置的准备 2.3.3 细胞接种 2.3.4 Real-Time PCR 2.3.5 统计学处理 2.4 实验结果 2.5 分析与讨论 2.6 本章小结 第3章 TNF-α和IL-1β对滑膜成纤维细胞中LOXs和MMP-1、MMP-2、MMP基因表达的影响 3.1 引言 3.2 实验材料、仪器与试剂 3.2.1 实验材料 3.2.2 实验仪器 3.2.3 实验试剂 3.2.4 实验试剂的配制 3.3 实验方法 3.3.1 细胞培养 3.3.2 炎症因子处理 3.3.3 Real一Time PCR 3.3.4 明胶酶谱 3.3.5 统计学处理 3.4 实验结果 3.4.1 不同浓度TNF-α对滑膜成纤维细胞中LOXs和MMPs(MMP-1、MMP-2、MMP-3)基因表达的影响 3.4.2 不同浓度IL—lB对滑膜成纤维细胞中L()Xs和MMPs(MMP-l、MMP一2、MMP-3)基因表达的影响 3.4.3 TNF一仅和IL-1β对滑膜成纤维细胞中LOXs和MMPs(MMP-1、MMP-2、MMP-3)基因表达的影响 3.4.4 TNF-α和IL-1β对滑膜成纤维细胞中MMP一2活性的影响 3.5 分析与讨论 3.6 本章小结 第4章 损伤性力学拉伸和TNF-α对滑膜成纤维细胞中LOXs和MMP-1、MMP-2、MMP-3基因表达的影响 4.1 引言 4.2 实验材料、仪器与试剂 4.2.1 实验材料 4.2.2 实验仪器 4.2.3 实验试剂 4.3 实验方法 4.3.1 细胞培养 4.3.2 炎症因子处理 4.3.3 力学因子加载及炎症因子刺激 4.3.4 滑膜细胞划痕实验 4.3.5 Real—rrime PCR 4.3.6 明胶酶谱 4.3.7 统计学处理 4.4 实验结果 4.4.1 5n/mL TNF-α对滑膜成纤维细胞中L0xs和MMPs基因表达的影响 4.4.2 损伤性力学拉伸(12％)与TNF-α对滑膜成纤维细胞中L0xs和MMPs(MMP-1、MMP-2、MMP-3)基因表达的影响 4.4.3 损伤性力学拉伸(12％)与TNF-α对滑膜成纤维细胞中MMP-2活性的影响 4.4.4 5n/mL TNF-α对滑膜成纤维细胞迁移的影响 4.5 分析与讨论 4.6 本章小结 第5章 损伤性力学拉伸和TGF-β，对滑膜成纤维细胞中LoXs和MMP-1、MMP-2、MMP-3基因表达的影响 5.1 引言 5.2 实验材料、仪器与试剂 5.2.1 实验材料 5.2.2 实验仪器 5.2.3 实验试剂 5.3 实验方法 5.3.1 细胞培养 5.3.2 生长因子处理 5.3.3 信号通路抑制剂处理 5.3.4 Real.Time PCR 5.3.5 统计学处理 5.4 实验结果 5.4.1 不同浓度TGF—β，对滑膜成纤维细胞中LOXs和MMPs(MMP-1、MMP-2、MMP-3)基因表达的影响 5.4.2 TGF一β1对正常滑膜成纤维细胞中L0xs和MMPs(MMP-1、MMP-2、MMP-3)基因表达的影响 5.4.3 TGF-β1对受损滑膜成纤维细胞中LOXs和MMPs(MMP-1、MMP-2、MMP-3)基因表达的影响 5.4.4 NF-KB信号通路抑制剂对损伤性力学加载和TGF-β1诱导的MMP表达及活性的影响 5.5 分析与讨论 5.6 本章小结 第6章 共培养下后交叉韧带成纤维细胞中LOXs的基因表达情况 6.1 引言 6.2 实验材料、仪器与试剂 6.2.1 实验材料 6.2.2 实验仪器 6.2.3 实验试剂 6.2.4 实验试剂的配制 6.3 实验方法 6.3.1 细胞培养 6.3.2 半定量聚合酶链式反应 6.3.3 Real—Time PCR 6.3.4 统计学处理 6.4 实验结果 6.4.1 与滑膜细胞共培养下，常规PcR反应出的LOXs基因家族在PcL成纤维细胞中的表达 6.4.2 与滑膜细胞共培养下，定量PCR反应出的LOXs基因家族在PcL成纤维细胞中的表达 6.5 分析与讨论 6.6 本章小结 第7章 结论与展望 7.1 主要结论 7.1.1 力学加载对滑膜成纤维细胞中L0xs和MMPs表达的影响 7.1.2 TNF-α和IL—lβ对滑膜成纤维细胞中LOXs和MMPs的表达及MMP-2活性的影响 7.1.3 损伤性力学加载和TNF-α对滑膜成纤维细胞中LOXs和MMPs的表达及MMP-2活性的影响 7.1.4 损伤性力学加载和TGF-β，对滑膜成纤维细胞中LOXs和MMPs的表达及MMP-2活性的影响 7.1.5 NF-KB信号通路参与力学加载和TGF-β1对MMP-2活性的调节过程