免疫学双语实验技术指导-(第二版)

目录 **篇 体外抗原抗体反应 1.1 传统的抗原抗体反应 3 1.1.1 凝集反应 4 实验一 直接凝集反应——玻片凝集反应鉴定ABO血型 4 实验二 间接凝集反应——测定类风湿因子的乳胶凝集试验 10 实验三 间接凝集抑制反应——测定HCG的间接乳胶凝集抑制试验(妊娠试验) 14 1.1.2 沉淀反应 18 实验四 对流免疫电泳 18 实验五 免疫电泳 23 1.1.3 补体参与的抗原抗体反应 27 实验六 补体凝集素途径测定 27 实验七 补体溶血空斑试验 32 1.2 功能性细胞因子和免疫球蛋白的检测 39 实验八 人血清过敏反应特异性IgE(SIgE)检测 40 1.3 HLA分型技术 45 实验九 PCR-SSP HLA分型技术——检测HLA B27基因 46 第二篇 免疫细胞分离 2.1 免疫细胞的分离和纯化 55 实验十 外周血单个核细胞分离 56 实验十一 小鼠骨髓来源巨噬细胞制备 60 实验十二 小鼠腹腔巨噬细胞的分离 64 实验十三 树突状细胞的制备 69 实验十四 自然杀伤细胞分离 73 实验十五 磁珠分选小鼠脾脏T细胞 82 实验十六 尼龙棉法分离小鼠B细胞 89 实验十七 磁珠分选B细胞 94 实验十八 小鼠肺泡巨噬细胞的分离和纯化 98 实验十九 小鼠肠道免疫细胞获取 103 第三篇 免疫细胞功能检测 实验二十 小鼠脾脏NK细胞活性检测 115 实验二十一 豚鼠T细胞E玫瑰花环试验 121 实验二十二 SAP酶标法测定T细胞亚群 125 实验二十三 单向混合淋巴细胞反应 130 实验二十四 细胞毒性T细胞活性测定 135 第四篇 抗体制备 实验二十五 多克隆抗体的制备 143 实验二十六 多克隆抗体的纯化 147 实验二十七 单克隆抗体制备 153 实验二十八 单链抗体(scFv)的构建 162 第五篇 常用的免疫相关疾病动物模型 实验二十九 豚鼠的过敏性休克反应模型 175 实验三十 Ⅰ型超敏反应小鼠模型——被动皮肤过敏反应 181 实验三十一 Ⅱ型超敏反应豚鼠模型——Forssman皮肤血管炎反应 186 实验三十二 Ⅲ型超敏反应动物模型——Arthus反应 190 实验三十三 Ⅳ型超敏反应小鼠模型——二硝基氟苯诱导的迟发型变态反应 194 实验三十四 小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎的诱导 198 第六篇 免疫学标记技术 实验三十五 酶联免疫吸附试验 207 实验三十六 间接免疫荧光法 212 实验三十七 免疫胶体金技术——测定HBsAg的试纸条双抗体夹心法 216 实验三十八 化学发光免疫标记技术检测乳腺癌患者HER 2 胞外结构域(ECD) 221 实验三十九 生物发光技术 229 第七篇 细胞凋亡的检测技术和流式细胞术 实验四十 细胞凋亡的DNA琼脂糖凝胶电泳分析 237 实验四十一 流式细胞仪检测细胞凋亡——Annexin V/PI双染色法 243 实验四十二 流式细胞术检测小鼠T淋巴细胞亚群(CD4+/CD8+T细胞) 248 实验四十三 流式细胞术检测CD4+T细胞上CXCR4的表达 257 实验四十四 流式细胞仪检测巨噬细胞胞内细胞因子 262 第八篇 糖免疫技术 实验四十五 IgG糖链检测 271 实验四十六 免疫球蛋白A1糖链的检测 275 实验四十七 细胞表面N糖蛋白的代谢标记及检测 280 实验四十八 胞内O-GlcNAc糖蛋白的标记及检测 284 主要参考文献 289 附录 293 附录一 常用试剂和培养液 294 附录二 实验常用小鼠的品系及模型 307 Contents Chapter One Antigen and Antibody Reaction in vitro 1.1 Classical Antigen and Antibody Reaction in vitro 3 1.1.1 Agglutination Reaction 7 Exp.1 Direct Agglutination Reaction — Slide Agglutination Test for Blood Type Detection 7 Exp.2 Indirect Agglutination Reaction — Latex Agglutination Test for Detection of RF 12 Exp.3 Indirect Agglutination Inhibition Reactions — Indirect Latex Agglutination Inhibition Test for the HCG Pregnancy Test 16 1.1.2 Precipitation Reaction 20 Exp.4 Countercurrent Electrophoresis 20 Exp.5 Immunoelectrophoresis 25 1.1.3 Antigen and Antibody Reaction Involved by Complement 29 Exp.6 Assay of Complement Lectin Pathway 29 Exp.7 Hemolytic Plaque Assay 35 1.2 Assay of Functional Cytokine and Immunoglobin 39 Exp.8 Human Serum Specific IgE (SIgE) Assay for Anaphylaxis 42 1.3 HLA Typing Techniques 45 Exp.9 HLA Typing for B27 with PCR SSP 49 Chapter Two Isolation of Immune Cells 2.1 Separation and Purification of Immune Cells 55 Exp.10 Separation of Mononuclear Cells from Whole Peripheral Blood 58 Exp.11 Preparation of Mouse Bone Marrow Derived Macrophages 62 Exp.12 Isolation of Mouse Peritoneal Macrophages 66 Exp.13 Generation Isolation of Dendritic Cells 71 Exp.14 Isolation of Natural Killer Cells 77 Exp.15 Isolation of T Cell from Mouse Spleen Using Magnetic Beads 85 Exp.16 Isolation and Purification of B Cells by Nylon Wool 91 Exp.17 Isolation and Purification of B Cells by MACS 96 Exp.18 Isolation and Purification of Murine Alveolar Macrophages 100 Exp.19 Isolation of Immune Cells from the Mouse Intestinal Immune System 107 Chapter Three Assay for the Functions of Immune Cells Exp.20 Mouse Spleen NK Cells Activity Assay 118 Exp.21 Erythrocyte Rosette Forming Cell Test (ERFC) for Guinea Pig T Cells 123 Exp.22 Detection of T Lymphocyte Subgroups in Peripheral Blood by the SAP 127 Exp.23 One way Mixed Lymphocyte Reaction 132 Exp.24 Measurement of CTL Activity 137 Chapter Four Preparation of Antibody Exp.25 Preparation of Polyclonal Antibody 145 Exp.26 Purification of Polyclonal Antibody 150 Exp.27 Preparation of Monoclonal Antibody 157 Exp.28 Generation of scFv 167 Chapter Five Animal Models of Immuno related Diseases Exp.29 Model of Anaphylaxis Shock in Guinea Pig 178 Exp.30 Murine Model of Type Ⅰ Hypersensitivity Reaction—Passive Cutaneous Anaphylaxis Model 183 Exp.31 Guinea Pig Type Ⅱ Hypersensitivity Reaction—Forssman Cutaneous Vasculitis Response 188 Exp.32 Rabbit Type Ⅲ Hypersensitivity Reaction—Arthus Reaction 192 Exp.33 Mouse Type Ⅳ Hypersensitivity Reaction—Dinitrofluorobenzene induced Delayed Type Hypersensitivity 196 Exp.34 Induction of Mouse Experimental Autoimmune Encephalomyelitis 201 Chapter Six Immunolabeling Technique Exp.35 Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA) 209 Exp.36 Indirect Immunofluorescence Assay 214 Exp.37 HBsAg Test Trip by Double Antigen Sandwich Immune Colloidal Gold Strip Technique 218 Exp.38 Detection of HER 2 Extracellular Domain of Breast Cancer Patients by Chemiluminescence Immunoassay 225 Exp.39 Bioluminescence Assay 232 Chapter Seven Flow Cytometry and Cell Apoptosis Detection Technique Exp.40 Thymocytes Apoptosis Assay by Agar