SIRT1及其激动剂白藜芦醇对糖尿病心血管并发症保护作用的实验研究/同济博士论丛

总序一 总序二 丛书前言 前言 第1章 引言 1.1 SIRT1基因与白藜芦醇 1.2 SIRT1、白藜芦醇与代谢 1.3 SIRT1、白藜芦醇和胰岛素抵抗 1.4 SIRT1、白藜芦醇和血管炎症 1.5 SIRT1、白藜芦醇与内皮功能 1.6 总结 参考文献 第2章 实验材料及仪器 2.1 实验主要仪器 2.2 试剂及相关材料 2.3 相关软件 2.4 主要溶液成分及配制 第3章 主要实验方法 3.1 细胞的获取和培养 3.1.1 细胞的获取及生长条件 3.1.2 细胞的传代 3.1.3 细胞计数 3.1.4 细胞冻存及复苏 3.2 蛋白提取 3.2.1 单层贴壁细胞总蛋白的提取 3.2.2 加药处理的贴壁细胞总蛋白的提取 3.2.3 BCA法蛋白含量测定 3.3 蛋白免疫印迹检测 3.4 流式细胞学实验 3.5 细胞活性实验CCK 3.6 细胞免疫荧光技术 3.7 细胞转染技术 3.8 RT-PCR技术 3.9 细胞内活性氧(ROS)的测定 第4章 白藜芦醇可能通过NF-KB途径减轻糖尿病血管炎症和 巨噬细胞浸润的动物实验 4.1 前言 4.2 材料和方法 4.2.1 材料和实验动物 4.2.2 血液生化检查 4.2.3 血浆ICAM-1、VCAM-1和MCP-1的检测 4.2.4 小鼠主动脉的分离 4.2.5 免疫组织化学和组织免疫荧光染色 4.2.6 蛋白提取、定量和Western Blot分析 4.2.7 统计分析 4.3 结果 4.3.1 白藜芦醇对实验小鼠一般状况的影响 4.3.2 白藜芦醇对实验小鼠糖脂代谢的影响 4.3.3 实验小鼠主动脉组织和各主要器官SIRT1的 表达 4.3.4 白藜芦醇对主动脉组织ICAM-1、VCAM-1和 MCP-1表达的影响 4.3.5 白藜芦醇对血浆炎症因子水平的影响 4.3.6 白藜芦醇对主动脉内巨噬细胞浸润的影响 4.3.7 白藜芦醇介导的对主动脉内NF-KB信号通路的 抑制作用 4.4 讨论 4.5 结论 参考文献 第5章 白藜芦醇对高糖诱导的血管平滑肌细胞增殖和氧化 应激的影响 5.1 前言 5.2 材料和方法 5.2.1 材料和试剂 5.2.2 细胞培养 5.2.3 细胞活性测定 5.2.4 细胞内活性氧簇(ROS)的测定 5.2.5 氧化应激标记物的测定 5.2.6 蛋白提取、定量和Western Blot分析 5.2.7 细胞周期分析 5.2.8 统计分析 结果 5.3.1 白藜芦醇对细胞活性的影响 5.3.2 白藜芦醇减少高糖诱导的VSMCs内ROS的形成 及氧化应激压力 5.3.3 氧化应激标记物的变化 5.3.4 白藜芦醇对细胞周期的影响 5.3.5 白藜芦醇对高糖刺激后细胞信号通路的影响 5.4 讨论 5.5 结论 参考文献 第6章 白藜芦醇可能通过减少细胞内活性氧簇（ROS）的生成、 下调LOX-1和p38MAPK的途径来抑制氧化低密度 脂蛋白诱导的巨噬细胞凋亡 6.1 前言 6.2 材料和方法 6.2.1 材料和试剂 6.2.2 细胞培养 6.2.3 脂蛋白的制备 6.2.4 细胞活性测定 6.2.5 细胞凋亡的测定 6.2.6 蛋白提取、定量和Western Blot分析 6.2.7 JC-1荧光染色及线粒体膜电位的检测 6.2.8 细胞内活性氧簇(ROS)的测定 6.2.9 统计分析 6.3 结果 6.3.1 白藜芦醇对细胞活性的影响 6.3.2 ox-LDL诱导巨噬细胞凋亡和泡沫细胞的形成 6.3.3 白藜芦醇能抑制ox-LDL诱导巨噬细胞的凋亡 6.3.4 白藜芦醇对凋亡相关Bcl-2和Bax蛋白的影响 6.3.5 白藜芦醇对ox-LDL诱导的Caspase-3活化的 影响 6.3.6 白藜芦醇纠正ox-LDL诱导的细胞线粒体膜 电位的缺失 6.3.7 白藜芦醇对细胞ROS的形成的影响 6.3.8 白藜芦醇下调ox-LDL诱导的LOX-1的表达 和p38MAPK的磷酸化 6.4 讨论 6.5 结论 参考文献 第7章 SIRT1可能通过内质网应激的机制减少糖尿病心肌病 中心肌细胞的凋亡 7.1 前言 7.2 材料和方法 7.2.1 材料和试剂 7.2.2 糖尿病大鼠模型的建立 7.2.3 糖尿病大鼠心脏结构和功能的评估 7.2.4 TUNEL及免疫组化染色 7.2.5 荧光定量PCR 7.2.6 AGEs的制备 7.2.7 细胞培养及细胞活性的测定 7.2.8 细胞凋亡的测定 7.2.9 Western blot 和 Caspase酶活性检测 7.2.10 统计分析 7.3 结果 7.3.1 SIRT1激动剂白藜芦醇改善STZ诱导的糖尿病 大鼠心肌肥厚和心功能 7.3.2 糖尿病大鼠心肌内SERCA2α、SIRT1、GRP78 BiP和CHOP的改变 7.3.3 SIRT1 siRNA和白藜芦醇对H9C2心肌细胞 SIRT1表达的影响 7.3.4 流式细胞术检测细胞凋亡 7.3.5 H9C2细胞在不同条件下SERCA2a水平的 改变 7.3.6 SIRT1能抑制内质网应激相关的信号通路 7.3.7 Caspase-12、Caspase-3和Caspase-9的 活性 7.4 讨论 7.5 结论 参考文献 第8章 结论与展望 8.1 结论 8.2 进一步工作的方向 附录 综述 后记