基因工程分册-基因工程及其分子生物学基础-第2版

1 基因工程的四大要素及实施要点1.1 基因工程操作中常用的工具酶1.2 基因的分离1.3 基因工程载体1.4 受体细胞和重组基因的导入1.5 基因重组的方法1.6 基因重组体的筛选2 外源基因在宿主细胞中的高效表达2.1 有效的转录起始与基因的高效表达2.2 mRNA的有效延伸和转录终止与基因的高效表达2.3 mRNA的稳定性与基因的高效表达2.4 有效的翻译起始与基因的高效表达2.5 遗传密码应用的偏倚性与基因的高效表达2.6 mRNA的二级结构与基因的高效表达2.7 RNA的加工与基因的高效表达2.8 mRNA序列上终止密码的选择2.9 表达质粒（或载体）的拷贝数及稳定性与基因的高效表达2.10 外源蛋白的稳定性与基因的高效表达3 基因的融合和融合蛋白的表达3.1 利用基因融合技术表达外源基因的缘由3.2 基因融合的策略3.3 基因融合和重组蛋白的产生3.4 基因融合和展示筛选3.5 基因融合和蛋白分泌3.6 融合蛋白的纯化3.7 融合蛋白的位点特异性切割附录 重组蛋白表达和纯化中常用的融合标签4 外源基因的分泌表达4.1 外源基因在E.coli细胞中的分泌表达4.2 外源基因在枯草杆菌中的分泌表达4.3 a-因子前导序列介导的酵母细胞分泌系统4.4 外源基因在哺乳动物细胞中的分泌表达5 重组蛋白的正确折叠及修饰5.1 重组蛋白的可溶性表达和折叠5.2 重组蛋白的重折叠5.3 外源蛋白在翻译后的修饰6 几种真核细胞表达系统6.1 哺乳动物细胞表达系统6.2 外源基因在哺乳动物细胞中的组成性表达和诱导性表达6.3 核型多角体病毒为载体的昆虫（细胞）表达系统6.4 转基因动物及其应用6.5 转基因植物及其应用6.6 DNA疫苗7 分子杂交技术7.1 探针与目标核酸相互作用的原理7.2 探针的选择和特异性7.3 杂交的速率与探针长度、浓度及杂交加速剂的关系7.4 杂交的*适条件7.5 放射性探针的制备7.6 非放射性探针的制备7.7 放射性和非放射性标记探针的应用范围7.8 DNA微阵列——基因组芯片8 粒子轰击和基因转移8.1 粒子轰击技术简介8.2 粒子轰击技术的应用范围9 聚合酶链反应及其应用9.1 聚合酶链反应的原理9.2 标准的PCR扩增方案9.3 PCR引物及其设计9.4 关于热稳定的DNA聚合酶9.5 PCR对模板质量的要求9.6 PCR反应缓冲液和循环（周期）数9.7 PCR相关技术的原理及其应用10 各种生物学展示技术10.1 噬菌体展示技术10.2 细菌展示技术10.3 酵母展示技术10.4 核糖体展示技术10.5 mRNA展示技术11 基因打靶技术及其应用11.1 同源重组与基因打靶11.2 组织特异性的基因打靶11.3 转座子介导的基因打靶11.4 RNA干涉与基因敲除11.5 反义核酸技术11.6 细菌基因敲除方法11.7 基因打靶技术的应用12 DNA序列分析12.1 Sanger的双脱氧链终止测序法12.2 Maxam-GilbertDNA化学降解法12.3 关于变性聚丙烯酰胺测序凝胶12.4 全基因组DNA序列的分析13 基因突变13.1 寡核苷酸介导的基因突变13.2 盒式突变法13.3 利用PCR进行DNA序列的突变13.4 关于随机突变14 寡核苷酸的化学合成14.1 寡核苷酸片段固相合成的原理及步骤14.2 寡核苷酸片段的纯化及鉴定15 蛋白质相互作用及其分析方法15.1 蛋白质相互作用的重要性15.2 蛋白质相互作用所产生的结果15.3 蛋白质相互作用的类型15.4 酵母双杂交系统15.5 利用绿色荧光蛋白(GFP)片段重组装研究蛋白质相互作用——细菌双杂交法15.6 蛋白质相互作用分析的in vitro方法16 蛋白质一核酸相互作用16.1 研究蛋白质一核酸相互作用的重要性16.2 蛋白质一核酸相互作用的类型16.3 蛋白质一核酸相互作用分析的in vitro方法17 蛋白质工程概述17.1 蛋白质分子的结构分析17.2 蛋白质的结构预测与分子设计17.3 基因工程是实现蛋白质工程的关键技术参考文献