肿瘤免疫治疗细胞制备操作规程及临床治疗进展

**部分　肿瘤免疫治疗细胞制备平台建设及操作规程 第1章　具备GMP基本条件的细胞制备中心要求………………………………3 **节　具备GMP基本条件的细胞制备中心基本构成………………………………………3 一、基本实验室………………………………………………………………………………3 二、辅助实验室………………………………………………………………………………3 第二节　建立细胞制备中心的基本原则…………………………………………………………4 第三节　细胞培养基的种类和储存使用要求……………………………………………………5 一、细胞培养基的种类………………………………………………………………………5 二、细胞培养基储存使用要求………………………………………………………………6 第四节　实验室仪器及设备运行………………………………………………………………6 一、细胞培养实验室的设置…………………………………………………………………6 二、细胞培养实验室的设备…………………………………………………………………8 第五节　细胞治疗从业人员基本要求………………………………………………………12 一、免疫细胞治疗临床医师…………………………………………………………………12 二、免疫细胞制备实验室人员………………………………………………………………12 第六节　实验室清洁要求及流程………………………………………………………………12 一、玻璃器皿的清洁要求及流程…………………………………………………………12 二、胶塞的清洁要求及流程………………………………………………………………16 三、塑料器皿的清洁要求及流程…………………………………………………………16 四、消毒要求及流程………………………………………………………………………17 五、实验室医疗污物的处理………………………………………………………………19 第七节　细胞免疫治疗细胞制备的质量保证和技术指标…………………………………19 一、细胞治疗质量控制要求………………………………………………………………19 二、细胞制备技术指标……………………………………………………………………20 第八节　保持细胞制备中心清洁的操作管理要求……………………………………………20 第九节　免疫治疗临床研究（试验）的数据和信息化管理…………………………………21 一、数据质量管理体系的建立和实施……………………………………………………21 二、细胞治疗数据管理系统的基本要求…………………………………………………22 三、数据管理的标准操作规程……………………………………………………………23 第十节　免疫治疗临床研究（试验）的患者信息保密性管理………………………………24 一、基本原则…………………………………………………………………………………24 二、报告制度…………………………………………………………………………………24 第十一节　肿瘤外周血标本收集及保存标准操作规程………………………………………25 一、适用范围…………………………………………………………………………………25 二、外周血标本收集要求……………………………………………………………………25 三、外周血分离………………………………………………………………………………25 四、外周血单个核细胞冻存步骤……………………………………………………………26 五、备注………………………………………………………………………………………27 第十二节　肿瘤组织标本处置标准操作规程(SOP)…………………………………………27 一、适用范围…………………………………………………………………………………27 二、操作方法…………………………………………………………………………………27 三、石蜡包埋组织收集………………………………………………………………………27 四、冻存组织收集……………………………………………………………………………28 第2章　肿瘤免疫治疗细胞采集标准操作流程………………………………30 **节　细胞采集前准备………………………………………………………………………30 一、患者知情同意书…………………………………………………………………………30 二、采集外周血单个核细胞注意事项………………………………………………………31 三、非特异性细胞免疫治疗的临床基本流程………………………………………………31 四、特异性细胞免疫治疗的临床基本流程………………………………………………37 第二节　外周血单个核细胞采集………………………………………………………………39 一、采集外周血单个核细胞的仪器、材料及试剂………………………………………39 二、临床申请流程及注意事项………………………………………………………………40 三、开机前准备………………………………………………………………………………40 四、血细胞分离全过程关键点………………………………………………………………41 五、采集过程中血流不畅原因及解决办法…………………………………………………42 六、分离结束后的工作流程…………………………………………………………………43 七、医疗防护与院内感染……………………………………………………………………43 第三节　外周血单个核细胞分离的临床具体步骤……………………………………………43 一、采集前两日………………………………………………………………………………43 二、外周血单个核细胞采集第1天…………………………………………………………43 三、外周血单个核细胞采集第2天…………………………………………………………44 四、拔出静脉置管……………………………………………………………………………45 五、相关数据回报、记录、录入……………………………………………………………45 第四节　外周血细胞分离观察记录……………………………………………………………45 第五节　外周血细胞分离护理流程……………………………………………………………45 一、探访患者…………………………………………………………………………………47 二、血细胞分离日期确定……………………………………………………………………47 三、血细胞分离前准备………………………………………………………………………47 四、血细胞分离中的患者护理及相关工作………………………………………………47 五、血细胞分离结束患者护理及相关工作…………………………………………………48 六、血细胞分离中的关键环节………………………………………………………………48 七、血细胞分离应急流程图…………………………………………………………………48 第3章　肿瘤免疫治疗细胞冻存与复苏标准操作流程………………………50 **节　外周血单个核细胞冻存与复苏所需材料及设备……………………………………50 第二节　外周血单个核细胞冻存与复苏操作步骤……………………………………………50 第三节　外周血单个核细胞冻存与复苏操作过程管理规范…………………………………56 第四节　外周血单个核细胞冻存与复苏应急措施……………………………………………56 第五节　细胞冻存与复苏的安全性保障………………………………………………………58 第4章　肿瘤免疫治疗细胞培养标准操作流程………………………………59 **节　非特异性细胞免疫治疗培养流程（以DC-CIK为例）……………………………59 第二节　特异性细胞免疫治疗培养流程………………………………………………………60 一、重组腺相关病毒介导的特异性肿瘤抗原负载树突状细胞（AAV-DC）及其CTL细胞培养SOP……60 二、特异性多肽负载树突状细胞培养标准操作流程……………………………………62 三、特异性多肽负载树突状细胞培养………………………………………………………71 第三节　细胞培养添加物配制操作流程………………………………………………………71 一、树突状细胞培养液的配制………………………………………………………………71 二、细胞因子溶液的配制和分装……………………………………………………………72 三、淋巴因子和多肽溶液的配制与分装……………………………………………………74 四、从全血和白细胞分离物中获取血浆……………………………………………………75 五、患者细胞冻存用自体血浆的处理及保存………………………………………………77 第四节　细胞培养质量监测流程………………………………………………………………78 一、内毒素及微生物检测（细菌、支原体及衣原体）……………………………………78 二、流式细胞仪检测用碘化丙啶的细胞染色步骤…………………………………………78 三、树突状细胞表型监测……………………………………………………………………79 四、培养细胞回输……………………………………………………………………………80 第5章　肿瘤免疫治疗细胞培养及临床回输的标准操作流程………………95 **节　细胞培养及回输流程…………………………………………………………………95 一、静脉回输DC-CIK或AAV-DC流程……………………………………………………95 二、浆膜腔（胸、腹、心包）回输DC-CIK或CIK流程……………………………………96 第二节　复苏冻存外周血单个核细胞培养CIK细胞流程……………………………………96 第三节　细胞回输不良反应的监测及处理……………………………………………………96 第6章　肿瘤细胞治疗的免疫学指标评价……………………………………98 **节　细胞免疫治疗患者的免疫学指标监测………………………………………………98 一、免疫功能监测……………………………………………………………………………98 二、肿瘤评估………………………………………………………………………………101 第二节　细胞治疗患者的随访………………………………………………………………102 一、研究筛选访视…………………………………………………………………………102 二、治疗和观察访视………………………………………………………………………102 第二部分　肿瘤免疫治疗的临床应用新进展 第7章　恶性黑色素瘤的免疫治疗……………………………………………107 一、细胞因子………………………………………………………………………………107 二、单克隆抗体……………………………………………………………………………107 三、肿瘤疫苗………………………………………………………………………………109 四、过继性免疫治疗………………………………………………………………………109 第8章　淋巴瘤的免疫治疗……………………………………………………113 一、单克隆抗体……………………………………………………………………………113 二、放射免疫治疗…………………………………………………………………………114 三、肿瘤疫苗………………………………………………………………………………114 四、树突状细胞为基础的细胞免疫治疗…………………………………………………114 第9章　头颈部肿瘤的免疫治疗……………………………………………117 一、单克隆抗体……………………………………………………………………………117 二、细胞因子………………………………………………………………………………120 三、过继性免疫治疗………………………………………………………………………121 四、肿瘤疫苗………………………………………………………………………………121 五、小结……………………………………………………………………………………122 第10章　乳腺癌的免疫治疗…………………………………………………125 一、主动免疫治疗…………………………………………………………………………126 二、被动免疫治疗…………………………………………………………………………127 三、免疫调节剂治疗………………………………………………………………………128 第11章　肺癌的免疫治疗……………………………………………………133 一、单克隆抗体治疗………………………………………………………………………133 二、肿瘤疫苗治疗…………………………………………………………………………133 三、过继性免疫治疗………………………………………………………………………135 四、细胞因子治疗…………………………………………………………………………136 第12章　消化道肿瘤的免疫治疗……………………………………………138 **节　食管癌的免疫治疗…………………………………………………………………138 一、单克隆抗体治疗………………………………………………………………………138 二、肿瘤疫苗治疗…………………………………………………………………………138 三、过继性免疫治疗………………………………………………………………………140 第二节　肝癌的免疫治疗……………………………………………………………………141 一、单克隆抗体治疗………………………………………………………………………141 二、肿瘤疫苗治疗…………………………………………………………………………142 三、过继性免疫治疗………………………………………………………………………143 第三节　胃癌的免疫治疗……………………………………………………………………147 一、基于效应T细胞的免疫治疗…………………………………………………………147 二、基于树突状细胞的免疫治疗…………………………………………………………148 三、基于DC联合细胞因子诱导的杀伤细胞免疫治疗……………………………………151 四、基于调节性T细胞的免疫治疗………………………………………………………151 五、展望……………………………………………………………………………………151 第四节　结直肠癌的免疫治疗…………………………………………………………………155 一、肿瘤疫苗治疗…………………………………………………………………………156 二、过继性细胞免疫治疗…………………………………………………………………156 三、单克隆抗体治疗………………………………………………………………………157 四、其他免疫治疗…………………………………………………………………………157 第五节　胰腺癌免疫治疗现状及进展………………………………………………………159 一、单克隆抗体治疗………………………………………………………………………159 二、过继性细胞免疫治疗…………………………………………………………………159 三、肿瘤疫苗治疗…………………………………………………………………………160 第13章　妇科肿瘤的免疫治疗…………………………………………………167 **节　卵巢癌的免疫治疗……………………………………………………………………167 一、单克隆抗体免疫治疗…………………………………………………………………167 二、肽段/蛋白载体介导的免疫治疗……………………………………………………168 三、过继性细胞免疫治疗…………………………………………………………………169 四、树突状细胞介导的免疫治疗…………………………………………………………169 第二节　宫颈癌的免疫治疗……………………………………………………………………170 一、肽段/蛋白载体介导的治疗性疫苗…………………………………………………170 二、树突状细胞介导的疫苗………………………………………………………………171 第14章　脑胶质瘤的免疫治疗…………………………………………………174 一、树突状细胞疫苗………………………………………………………………………174 二、过继性细胞免疫治疗…………………………………………………………………175 三、其他免疫治疗方法……………………………………………………………………176 第15章　肾癌的免疫治疗………………………………………………………179 一、细胞因子治疗…………………………………………………………………………179 二、肿瘤疫苗………………………………………………………………………………180 三、树突状细胞（DC）为基础的细胞免疫治疗…………………………………………180 四、分子靶向治疗…………………………………………………………………………182 第16章　“化疗联合免疫治疗”模式治疗转移性乳腺癌临床实践………185 一、化疗联合免疫治疗蒽环或紫杉类治疗失败的转移性乳腺癌………………………185 二、三阴性乳腺癌的特色治疗……………………………………………………………185 三、小剂量环磷酰胺口服维持治疗及其免疫调节作用…………………………………186 四、乳腺癌肝转移的临床治疗……………………………………………………………186 五、含健择方案治疗乳腺癌脊髓转移的临床探索………………………………………187 六、恶性浆膜腔积液的免疫治疗…………………………………………………………187 附录A　几种常见肿瘤的基因分型……………………………………………………………192 附录B　细胞治疗相关国际学术组织…………………………………………………………193