生物化学与分子生物学实验教程

**篇 基本操作及常用仪器使用
**章 生物化学与分子生物学常用技术
**节 离心技术
一、离心技术的基本原理
二、离心机的类型和主要构造
三、离心方法
第二节 核酸的分离与纯化
一、核酸分离的原则
二、核酸分离的主要步骤
三、核酸的浓度、纯度测定和完整性鉴定
四、核酸的保存
第三节 蛋白质和酶的纯化
一、蛋白质分离的原則
二、蛋白质分离的主要步骤
三、蛋白质的纯化
四、蛋白质浓度的测定
五、蛋白质的保存
第四节 分光光度技术
一、分光光度技术基本原理
二、分光光度计种类、结构和工作原理
第五节 电泳技术
一、电泳技术发展史
二、电泳技术的基本原理
三、影响电泳分离的主要因素
四、电泳的分类
五、常用电泳技术
第六节 层析（色谱）技术
一、层析（色谱）技术发展简史
二、层析方法的一般尿理
三、层析的分类
四、常见的层析技术
第七节 聚合酶链反应
一、PCR的基本原理
二、PCR的反应条件
三、常见的PCR种类
四、PCR技术的应用及其注意事项
第八节 印迹技术
一、DNA印迹
二、RNA印迹
三、蛋白质的印迹分析
第二章 基本实验操作
**节 洗涤和干燥
一、玻璃仪器的洗涤清洁
二、玻璃仪器的干燥
三、沉淀的过滤和洗涤
第二节 常用的实验操作技术
一、吸量管的种类和使用
二、混匀
三、保温
四、过滤
五、离心沉淀法
六、实验样品的制备
第三章 常用仪器
**节 分光光度计
一、仪器组成
二、使用和维护
三、注意事项
第二节 离心机
一、仪器组成
二、种类
三、使用和维护
第三节 电泳仪
一、使用方法
二、注意事项
第四节 PCR仪
一、使用方法
二、注意事项
第五节 真空冷冻干燥机
一、使用方法
二、注意事项
第六节 高压蒸气灭菌锅
一、使用方法
二、注意事项
第七节 恒温培养箱
一、使用万法
二、注意事项
第八节 生物安全柜
一、使用方法
二、注意事项
第四章 实验室规则及安全防护
一、实验室规則
二、实验室的安全与防护
第五章 实验报告的撰写
一、实验报告书写的具体要求
二、书写实验报告的基本内容

第二篇 经典生物化学实验
第六章 蛋白质定量分析实验
实验一 双缩脲法测定血清蛋白质含量
实验二 Folin-酚试剂法测定蛋白质含量
实验三 紫外分光光度法测定蛋白质含量
实验四 考马斯亮蓝结合法测定蛋白质含量
第七章 层析实验
实验五 纸层析法观察转氨基作用
实验六 葡聚糖凝胶柱层析分离血红蛋白与鱼精蛋白
实验七 离子交换层析分离混合氨基酸
第八章 电泳实验
实验八 醋酸纤维素薄膜电泳
实验九 SDS-PAGE测定蛋白质的分子量
第九章 酶学实验
实验十 血清丙氨酸氨基转移酶活性测定（改良Mohun法）
实验十一 过氧化氢酶米氏常数的测定
第十章 分子生物学基础实验
实验十二 肝组织中核酸的提取和定量分析
实验十三 DNA的提取及紫外吸收法测定含量
——蛋白酶K-酚抽提法
实验十四 总RNA的提取制备与检测
——异硫氰酸胍-酚-三氯甲烷一步法
实验十五 Northern印迹杂交

第三篇 综合性实验
实验一 肝糖原的提取和定量测定
实验二 BCA法测定蛋白质含量
实验三 质粒DNA的提取
实验四 DNA的限制性酶切与琼脂糖凝胶电泳
实验五 质粒pUC18／GAPDH基因的PCR扩增
实验六 DNA连接实验
实验七 重组DNA转化与蓝白斑筛选

第四篇 自主设计性实验
概述
一、设计性实验的內涵
二、开展设计性实验的目的与意义
三、设计性实验的界定
四、设计性实验的教学实施
附 实验报告范例
实验一 酪蛋白等电点的测定
实验二 胰蛋白酶对蛋白质的消化和影响酶作用的因素
实验三 丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用
实验四 氨中毒实验
实验五 肾上腺素、胰岛素对血糖浓度的调节作用
附录一 常用缓冲溶液的配制
附录二 常用酸碱标准溶液的配制
附录三 常用酸碱指示剂的配制
附录四 RCF与转速列线计算图