生物化学实验方法和技术

目录
前言
上篇 生物化学实验方法和技术原理
**章 生物化学分离方法 3
**节 离心技术 3
一、离心沉降速率影响困素 3
二、沉降系数 5
三、离心设备 7
四、制各超离心法 7
第二节 层析技术 10
一、薄层层析 10
二、聚眈胶薄膜层析 11
三、凝胶层析 11
四、离子交换层析 13
五、亲和层析 13
六、气相色谱四
七、高效液相色谱 16
第三节 电泳技术 16
一、影响电泳的主要因素 17
二、常用电泳支持介质 18
三、聚丙烯酷胶凝胶盘状电泳 19
四、连续密度梯度电泳 20
五、SDS-聚丙烯酷脑凝胶电泳 21
六、等电聚焦电泳 22
七、双向凝胶电泳 22
八、毛细管电泳 22
九、电泳新技术 23
十、电泳相关技术 24
第四节 膜分离技术 28
一、膜的分类 28
二、膜的性能 29
三、膜的使用寿命 30
四、膜的分离技术 30
第二章 生物化学分析方法 33
**节 重量法 33
第二节 化学法 34
第三节 分光光度法 35
第四节 酶法 36
一、化学方法 37
二、仪器方法 37
第五节 色谱法 37
第六节 主要生物物质分析 38
一、碳水化合物分析 38
二、核酸分析 42
三、蛋白质分析 44
第三章 生物化学制备方法 46
**节 生物化学制备方法的特点 46
第二节 溶剂提取法 46
第三节 沉淀法 48
一、盐析法 48
二、有机榕剂沉淀法 49
三、非离子多聚物沉淀法 49
第四节 浓缩与干燥 49
第五节 超临界流体萃取 50
第六节 萃取与相分离 52
第七节 结晶 53
第四章 生物化学代谢研究方法 55
中篇 生物化学实验
**单元 基础训练 61
实验一 生化实验要求及基本实验设备识知 61
实验二 植物试材水分测定和干样制备 63
实验三 高等植物材料丙酣粉的制备 67
实验四 缓冲溶液的配制和氨基酸两性性测定 69
实验五 分光光度计线性分辨范围测定 73
第二单元 基本实验 76
实验六 酶的基本性质 76
实验七 转氨酶活性鉴定(薄层层析法) 80
实验八 淀粉酶活力测定 83
实验九 腮酶Km值测定 86
实验十 蛋白质的水解和氨基酸的纸层析法分离 90
实验十一 蛋白质的两性性质及等电点的测定 93
实验十二 蛋白质含量测定(考马斯亮蓝G-250法) 95
实验十三 还原糖和总糖含量的测定(3，5-二硝基水杨酸比色法) 97
实验十四 丙酣酸含量的测定 100
实验十五 抗坏血酸含量测定(2，6-二氯酷能酣法) 102
第三单元 重点实验 107
实验十六 脂肪含量的测定及高级脂肪酸组分分析(气相色谱法) 107
实验十七 单核苦酸的离子交换柱层析分离 110
实验十八 RuBP矮化酶加氧酶的纯化 114
实验十九 连续密度梯度电泳法测定蛋白质的分子质量及纯度 117
实验二十 过氧化物酶同工酶聚丙烯酷股凝胶圆盘电泳 120
实验二十一 双向免疫扩散试验 124
实验二十三 质粒DNA的提取、酶切及电泳鉴定 127
实验二十三 高等植物DNA的提取和纯度鉴定 131
实验二十四 酵母蛋白质和RNA的制备(稀碱法) 133
实验二十五 酵母RNA的提制(浓盐法) 136
实验二十六 多酣氧化酶的制备和化学性质 139
第四单元 综合实验 142
实验三十七 种子蛋白质系统分析 142
实验二十八 果实菠萝蛋白酶的动力学测定 150
实验二十九 苯丙氨酸解氨酶的纯化及活性测定 156
第五单元 选择实验 162
实验三十 蛋白质含量测定(双缩腮法) 162
实验三十一 蛋白质含量测定(Folin-酣法) 164
实验三十三 紫外吸收法测定蛋白质含量 166
实验三十三 还原糖含量的测定(Somogyi-Nelson比色法) 168
实验三十四 可溶性总糖的测定(惠酣比包法) 171
实验三十五 可榕性总糖的测定(地衣酚-硫酸法) 174
实验三十六 直链淀粉和支链淀粉的测定(双波长法) 175
实验三十七 租纤维的测定(酸性洗涤剂法) 179
实验三十八 果胶质含量测定(重量法) 180
实验三十九 1398中性蛋白酶活性的测定 183
实验四十谷 物种子中赖氨酸含量的测定 186
实验四十一 甲醒滴定法测定氨基氮 188
实验四十二 醋酸纤维薄膜电泳分离核昔酸 191
实验四十三 蛋白质脱盐(透析和凝胶过滤) 193
实验四十四 叶绿素含量测定(分光光度法) 197
实验四十五 质膜透性与抗旱性鉴定(连续升温电导法) 200
下篇 附录
一、实验室安全及防护知识 207
二、Union Carbide各种型号透析管的渗透范围 210
三、Sepctro por再生纤维素膜锺析袋的鼓据 210
四、纤维素酯膜透析袋的数据 212
五、Amicon圆形超谑膜的规格和有效过滤面积的数据 213
六、Amicon圆形超滤膜的流速 214
七、硫酸镀饱和度的常用襄 214
1.调整硫酸镀潜液饱和度计算表(25℃) 214
2.调整硫酸镀溶液饱和度计算表(0℃) 215
3.调整硫酸镜溶液饱和度计算表(23℃) 216
八、缓冲溶液的配制方法 217
1.氯化钾-盐酸缓冲液(0.05mol/L，pH 10~22.25℃) 217
2.甘氨酸-盐酸缓冲液(0.05mol/L，pH 22~36.25℃) 217
3.邻苯二甲酸氢锦-盐酸缓冲液(0.05mol/L，pH 2.2~4.0，25℃) 217
4.拧攘酸-拧攘酸铀缓冲液(01mol/L，pH 3.0~62) 218
5.磷酸氢二销-拧攘酸缓冲液(pH 2.6~7.6) 218
6.乙酸-乙酸饷缓冲液(0.2mol/L，pH 3.7~5.8，18℃) 218
7.二甲基戊二酸-氢氧化铀缓冲液(0.05mol/L，pH 3.2~7.6) 219
8.丁二酸告氧化纳缓冲液(0.05mo 1/L，pH 3.8~6.0，25℃) 219
9.邻苯二甲酸氢佣-氢氧化铀缓冲液(pH 4.1~5.9，25℃) 220
10.磷酸氢三铀-磷酸三氢铀缓冲液(0.2mol/L，pH 5.8~8.0，25℃) 220
11.磷酸二氢伺-氢氧化铀缓冲液(pH 5.8~8.0) 220
12.Tris-HCl缓冲液(0.05mol/L，pH 7~9) 221
13.巴比妥-盐酸缓冲液(pH 6.8~9.6，18℃) 221
14.2，4，6-三甲基唯睫-盐酸缓冲液(pH 6.4~8.3) 221
15.跚砂-唰酸缓冲液(pH 7.4~9.0) 222
16.跚砂缓冲液(pH 8.1~10.7，25℃) 222
17.甘氨酸-氢氧化铀缓冲液(pH 86~106，25℃) 222
18.碳酸铀碳酸氢铀缓冲液(0.1mol/L，pH 9.2~10.8) 223
19.跚酸-氧化饵-氢氧化铀缓冲液(0.1mol/L，pH 8.O~10.2) 223
20.二乙醇胺-盐酸缓冲液(0.05mol/L，pH 8.0~10.0，25℃) 223
21.硼砂一氢氧化铀缓冲液(0.05mol/L，硼酸根，pH 9.3~10.1) 224
22.磷酸氢二锅告氧化锅缓冲液(0.025mol/L，pH 11.0~11.9，25℃) 224
23.氯化钾一氢氧化铀缓冲液(0.05mol/L，pH 12.0~13.0，25℃) 224
24.广范围缓冲液(pH 2.6~12.0，18℃) 225
25.离子强度恒定的缓冲液(pH 2.0~12.0) 225
26.酸度计标准缓冲溶液的配制 226
九、凝胶数据表 227
1.Sephadex G型交联葡聚糖凝肢的数据 227
2.Sephadex G型交联葡聚糖凝胶榕胀所需时间 228
3.琼脂糖凝肢的数据 228
4.Superose的数据 229
5.琼脂糖凝胶Bio-GelA型的数据 229
6.Bio-Gel P型凝胶的数据 230
7.交联聚苯乙烯凝胶Bio-BeadsS-X型的数据 230
8.制备级Superdex凝胶过滤介质的数据 231
9.聚乙烯醇型凝胶Toyopearl的数据 232
10.各种凝肢所允许的*大操作压 232
十、凝肢过温用标准蛋白 232
1.凝胶过滤用低分子质量标准的组成 232
2.凝肢过滤用高分子质量标准的组成 233
3.凝肢过滤用分子质量标准品 233
十一、薄层层析分离各类物质常用的展层溶剂 233
十二、各类物质常用的薄层显色 235
十三、腐蚀性万能薄层显色剂 235
十四、电豫染色方法 235
(一)核酸染色 235
(二)蛋白质染色 237
(三)糖蛋白染色 238
(四)脂蛋白染色 239
(五)同工酶染色 239
十五、实验误差与提高实验准确度的方法 245
(一)实验误差 245
(二)误差来源 246
十六、常用仪器使用方法 247
(一)恒温箱 247
(二)电热恒温水浴 248
(三)电动离心机 248
(四)722型光栅分光光度计 249
(五)751G型分光光度计 250
(六)自动部分收集器 251
(七)核酸蛋白检测仪 253
(八)电子顶载天平 253
(九)电子分析天平 254
(十)pHS-3C型数字酸度计 255
(十一)pHS-2型酸度计 255
(十二)移液器的使用 257
图版