植物学实验

**部分 基本实验技能 实验一 光学显微镜的使用及维护 实验二 临时装片及染色 实验三 徒手切片法 实验四 显微测量技术 实验五 整体透明制片法 实验六 组织离析制片技术 实验七 冰冻切片技术 实验八 石蜡切片技术 实验九 被子植物花图式与花程式 实验十 植物分类检索表的编制与使用 实验一 光学显微镜的使用及维护 植物细胞的直径一般为10～50μm，肉眼无法观察，因此，必须借助各种显微镜来观察，其中光学显微镜是以人眼可以观察到的可见光（包括紫外线）作为光源进行观察的仪器，是生物科学研究和教学过程中*重要和*常用的工具之一。光学显微镜利用光学成像原理把被观察的物体放大几百倍甚至千倍，从而使人们能够对微小的生物或者生物体的组织和细胞进行观察。从事生命科学的学习和研究，就必须了解光学显微镜的基本构造和性能，掌握正确的使用方法。 一、光学显微镜的构造 光学显微镜种类繁多，结构也繁简各异，但其基本结构主要包括机械部分和光学部分（图1-1）。 图1-1 光学显微镜 （一）机械部分 光学显微镜机械部分主要有镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、标本移动器、粗调焦轮、细调焦轮及亮度调节旋钮等（图1-1）。 1. 镜座 镜座是显微镜的基座，用以支持镜体平衡，其上装有反光镜或照明光源。 2. 镜柱 镜柱是镜座上面直立的短柱，连接、支持镜臂及以上的部分。 3. 镜臂 镜臂弯曲如臂，上接镜筒、下接镜柱，支持载物台、聚光器和调焦装置。是取放显微镜时手握的部位。直筒显微镜镜臂和镜柱连接处有活动关节，可使显微镜在一定范围内后倾，一般不超过30°。 4. 镜筒 镜筒一般长160～4250px。其上端放置目镜，下端与物镜转换器相连。双筒斜式的镜筒，两镜筒距离可以根据两眼距离及视力来调节。 5. 物镜转换器 物镜转换器是固着在镜筒下端的圆盘，其上装有不同倍数的物镜。可以左右自由转动，便于更换物镜。 6. 载物台 载物台是放置切片的平台，中央有一个通光孔，旁边装有固定玻片的压片夹或标本移动器。有的显微镜载物台下装有聚光器。 7. 调焦装置 镜臂两侧有粗、细调焦轮各一对，旋转时可使镜筒上升或下降，以便得到清晰物像，即调焦。大的一对是粗调，每旋转一周可使镜筒升降10mm，用于在低倍物镜下观察；小的一对是细调，每旋转一周可使镜筒升降0.1mm，用于在高倍物镜下观察。使用时，必须先用低倍镜，后用高倍镜。 （二）光学部分 光学显微镜光学部分主要有物镜、目镜、聚光器和光源（或反光镜）等（图1-1）。 1. 物镜 它是显微镜中*重要的光学部件，安装在物镜转换器上，决定了显微镜的质量、分辨率和放大倍数。常见的物镜有低倍镜（4×、10×）、高倍镜（20×、40×、100×），使用低倍镜和高倍镜时，物镜与玻片标本之间的介质是空气；而100×物镜称为油镜头，使用油镜头时，物镜与标本之间的介质为香柏油（液体石蜡亦可）。物镜上表面的标记数字表示该物镜的各项参数。 2. 目镜 目镜位于镜筒的上方，不同的显微镜有单目镜与双目镜的差别，目镜的功能是使物镜形成的实像进一步放大，在人眼的明视距离上成一虚像，使之便于观察。目镜放大倍数与物镜放大倍数的乘积为总放大倍数，但目镜的放大作用不是提高显微镜分辨率的决定因素。目镜内可安装一段头发作“指针”，也可安装测微尺。 3. 聚光器 聚光器安装在载物台的下方，可弥补光源亮度的不足，适当改变从光源射来光线的性质，将从光源照射过来的光线聚集在被检标本上，以增强照明。聚光器由透镜组和孔径光阑（光圈）组成，可以通过调节孔径光阑的开口大小来改变视野中物体的明暗和反差。也可以通过聚光器升降螺旋升降聚光器来改变标本的照明度，改变视野的范围。 4. 光源 光学显微镜的光源位于镜座内，通常由照明灯泡、折光系统和一枚聚光器组成，常用高亮度的卤素灯泡，镜座右侧具有亮度调节旋钮调节光线强弱。老式光学显微镜则采用反光镜作为取光设备，反光镜一面为平面镜，另一面为凹面镜，镜体可以在其弧弓支架上自由翻转以调整位置，使光线射向聚光器。 二、光学显微镜的使用与维护 1. 取放 拿取显微镜时，右手握住镜臂，左手平托镜座。将显微镜放置于实验台距边缘750px 处，身体的左前方，腾出右侧位置进行观察记录或绘图。 2. 对光 打开内置光源的开关，先用低倍物镜，将光圈开到*大位置，用左眼或双眼观察目镜。调节好光源的亮度，使视野内的光线明亮、均匀又不刺眼。 3. 目镜观察 观察时要睁开双眼，用左眼观察显微镜目镜视野中的像。如果是双筒显微镜，则应睁开双眼观察。 4. 低倍镜使用 将玻片标本放置在载物台上固定好，使观察材料一面正对着通光孔中心。转动粗调焦轮下降物镜至距玻片5mm处，接着用左眼（或双眼）注视镜筒，再慢慢用粗调焦轮上升物镜，直到看见清晰的物像为止。 5. 高倍镜使用 由于高倍镜视野范围更小，因此使用前应在低倍镜下选好欲观察的目标，并将其移至视野中央，然后转高倍镜至工作位置。高倍镜下视野变暗且物像不清晰时，可调节光亮度和细调焦轮。由于高倍镜使用时与玻片之间距离很近，操作时要特别小心，以防镜头碰击玻片。 6. 油镜使用 在高倍镜下将要观察的样品移至视野中央，上升镜筒约37.5px，然后转油镜至工作位置。在盖玻片要观察的位置上滴1滴香柏油，慢慢下降镜筒，使之与油滴接触，然后慢慢调节细调焦轮，上升镜筒到物像清晰。因油镜工作距离非常小（约为0.2mm），所以这步操作要特别小心，防止镜头压碎玻片。 7. 调换玻片 观察时如需调换玻片，要将高倍镜换成低倍镜，取下原玻片，换上新玻片，重新从低倍镜开始观察。 8. 使用后整理 观察完毕后，上升镜筒，取下玻片，将物镜转离通光孔呈非工作状态，放上擦镜布，按原样收好显微镜。 9. 使用注意事项 ①显微镜是精密仪器，使用时一定严格遵守操作规则，不许随意拆修。②随时保持显微镜清洁。观察临时装片时，要将盖玻片四周溢出的水或其他液体用吸水纸吸干净，以免污染镜头。已被污染的镜头要用镜头纸擦拭。③观察时，坐姿要端正，双目同时张开，切勿睁一眼、闭一眼或用手遮挡一只眼。④观察玻片时，一定要按先低倍物镜、后高倍物镜顺序使用。细调焦轮是在观察到物像而不够清晰时使用，切忌沿同一方向不停地转动细调焦轮。