生物工程基础实验

章 常用仪器设备及使用 001
一、PCR 仪的原理及使用方法 001
二、台式离心机的使用 003
三、分光光度计原理及使用 005
四、自动核酸蛋白分离色谱仪 008
五、电泳仪的使用 011
六、凝胶成像系统的使用 017
七、旋转蒸发器的使用 018
八、索氏提取器 020
九、微波-超声波合成萃取仪 021
十、气相色谱-质谱联用仪 023
十一、BT 系列蠕动泵 025

第二章 生物化学实验 028
实验一 甲醛滴定法 028
实验二 糖的定量：3,5-二硝基水杨酸比色法 030
实验三 植物组织中可溶性总糖的测定 033
实验四 血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳 035
实验五 蛋白质的沉淀反应 037
实验六 肝脏谷丙转氨酶活力测定 038
实验七 维生素C 的定量测定（2,6-二氯酚靛酚滴定法） 041
实验八 粗脂肪提取和含量测定 043
实验九 动物组织中脱氧核糖核酸的制备及测定 045

第三章 分子生物学实验 048
实验一 DNA 的琼脂糖凝胶电泳 048
实验二 紫外分光光度法分析DNA 浓度与纯度 050
实验三 CTAB 法提取植物基因组DNA 052
实验四 SDS 法提取植物基因组 DNA 053
实验五 大肠杆菌基因组DNA 的提取 055
实验六 绿色荧光蛋白基因的PCR 扩增 057
实验七 硅胶膜吸附法纯化DNA 片段 060

第四章 基因工程实验 062
实验一 质粒DNA 的提取与检测 062
实验二 质粒DNA 的酶切反应 067
实验三 琼脂糖凝胶电泳回收DNA 片段 070
实验四 目的DNA 片段与载体的连接反应 072
实验五 大肠杆菌感受态细胞的制备 076
实验六 大肠杆菌感受态细胞的转化 079
实验七 阳性克隆的筛选和鉴定 082
实验八 外源基因在大肠杆菌中的诱导表达 085
实验九 SDS-PAGE 检测表达蛋白 089

第五章 酶与蛋白质工程实验 094
实验一 过氧化氢酶活性的测定 094
实验二 淀粉酶的提取和活性测定 096
实验三 胆绿素还原酶的修饰与活性基团鉴定 099
实验四 壳聚糖微球固定化木瓜蛋白酶 100
实验五 溶菌酶的制备及活力测定 103
实验六 酶法澄清苹果汁加工工艺优化 105
实验七 酵母细胞固定化 106
实验八 pH 对酶活力的影响——适pH 的测定 108
实验九 温度对酶活力的影响——适温度的测定 110
实验十 酵母中蔗糖酶的提取及活性测定 112

第六章 发酵工程实验 115
实验一 自然界中发酵菌株的分离 115
实验二 淀粉酶发酵菌种的初筛 117
实验三 液化型淀粉酶活力的测定 118
实验四 液化型淀粉酶发酵菌种的紫外诱变育种 121
实验五 发酵菌种的复壮和保藏 122
实验六 正交实验法优化生产菌株发酵培养基的配方 124
实验七 生长曲线和产物形成曲线的测定 126

第七章 生物分离工程实验 129
实验一 牛乳中酪蛋白的提取及含量测定 129
实验二 维生素A 的提取及含量测定 132
实验三 大蒜细胞SOD 酶的提取与分离 136
实验四 香菇多糖的提取、纯化及含量测定 141
实验五 离子交换树脂总交换容量的测定 143
实验六 离子交换柱色谱分离混合氨基酸 148
实验七 PEG/硫酸盐双水相系统相图制作 152
实验八 PEG/(NH4)2SO4 系统中蛋白质分配系数测定 154
实验九 胰蛋白酶的提取与激活 158
实验十 胰蛋白酶的酶活和比活测定 161
实验十一 反胶束萃取技术提取胰蛋白酶 164

附录一 常用碱基符号 168
附录二 常用氨基酸符号 169
附录三 常用缓冲液的配制 170
附录四 常用上样缓冲液配制 173
附录五 常用电泳缓冲液的配制 174
附录六 常用试剂的配制 175
附录七 常用缓冲液母液或储存液 178
附录八 常用抗生素 179
附录九 硫酸铵饱和度计算及加入方式 180

参考文献 182