细胞培养与细胞水平筛选(杨华军)

学习情境一 接受任务，任务前信息收集 001
情境描述 001
学习目标 001
任务书 001
任务分组 002
工作计划 002
任务实施 003
评价反馈 004
相关知识 005
一、EGFR背景知识 005
1．药物靶点 005
2．EGFR简介 005
3．EGFR抑制剂 006
二、实验方案讨论结果案例 009 学习情境二 实验设施和实验设备 010
情境描述 010
学习目标 010
任务书 010
任务分组 010
工作计划 011
任务实施 012
评价反馈 014
相关知识 015
一、细胞培养实验室生物安全 015
二、细胞培养实验室的设备 015
1．超净工作台、生物安全柜 016
2．细胞培养箱 017
3．恒温水浴锅 018
4．台式离心机 018
5．冰箱和冰柜 019
6．细胞计数器 020
7．倒置显微镜 020
8．液氮罐 020
9．高压灭菌锅 020
三、试剂和耗材 021
1．细胞培养容器 021
2．吸管和移液器 022
3．离心管和细胞冻存管 023
4．细胞消化液 024
5．基础培养基 024
6．血清 025
7．抗生素 025
四、无菌技术 026
1．无菌工作区域 026
2．良好的个人卫生 026
3．无菌试剂和培养基 026
4．无菌操作 026 学习情境三 细胞的复苏与冻存 028
情境描述 028
学习目标 028
任务书 028
任务分组 028
工作计划 029
任务实施 030
评价反馈 032
相关知识 033
一、液氮罐的使用 033
1．液氮的来源 033
2．液氮的特性 033
3．液氮使用注意事项 034
二、NCI-H1975细胞的复苏 034
1．NCI-H1975细胞的相关信息 034
2．美国模式培养物集存库 035
3．复苏NCI-H1975细胞的实验设备、试剂和耗材 035
4．复苏NCI-H1975细胞的实验流程 035
5．冻存NCI-H1975细胞的实验设备、试剂和耗材 037
6．冻存NCI-H1975细胞的实验流程 037 学习情境四 细胞的传代培养与观察 038
情境描述 038
学习目标 038
任务书 038
任务分组 038
工作计划 039
任务实施 041
评价反馈 043
相关知识 044
一、细胞的常规观察 044
1．细胞形态 044
2．细胞生长 045
3．营养液 046
4．生物污染 046
二、NCI-H1975细胞的传代培养 049
1．传代时间的确定 049
2．NCI-H1975细胞传代所需的实验设备、试剂和耗材 049
3．NCI-H1975细胞传代实验流程 049
4．悬浮细胞的传代 050
三、细胞数目和细胞存活率的测定 050
1．血球计数板的基本构造 050
2．使用血球计数板进行细胞数目和存活率的测定 051 学习情境五 细胞铺板及铺板密度的确定 052
情境描述 052
学习目标 052
任务书 052
任务分组 052
工作计划 053
任务实施 054
评价反馈 055
相关知识 056
一、细胞铺板 056
二、细胞梯度稀释观察法 058
三、细胞梯度稀释生长曲线法 059 学习情境六 细胞铺板和药物处理 061
情境描述 061
学习目标 061
任务书 061
任务分组 061
工作计划 062
任务实施 063
评价反馈 064
相关知识 066
一、细胞铺板 066
二、药物处理 066
1．药物储存液的配制 066
2．测试药物的梯度稀释 067
3．药物处理 068 学习情境七 实验结果的检测 069
情境描述 069
学习目标 069
任务书 069
任务分组 069
工作计划 070
任务实施 071
评价反馈 073
相关知识 074
一、实验结果的检测 074
1．CellTiter-Glo?细胞活力检测法 074
2．MTT法 075
3．CCK-8法 076
二、多功能酶标仪的使用 078 学习情境八 实验数据的处理和呈现 079
情境描述 079
学习目标 079
任务书 079
任务分组 079
工作计划 080
任务实施 081
评价反馈 083
相关知识 084
一、测试药物对细胞活性抑制率的计算 084
二、GraphPad Prism绘制量效曲线并计算IC50值 085
三、绝对IC50和相对IC50 090
四、实验结果呈现 091 参考文献 092