包邮医学微生物学实验技术

内容简介

材料
1．菌种：葡萄球菌，大肠杆菌18～24小时肉汤培养物。
2．培养基：普通琼脂平板。
3．化学消毒剂：0．1％升汞、5％石炭酸、2％碘酒、2％红汞。
4．其他：灭菌滤纸圆片(直径6毫米)、镊子等。
方法
1．分别以接种环挑取葡萄球菌、大肠杆菌菌液数环，分别放到两个普通琼脂平皿上，作来回连续划线，使菌液密布于琼脂平皿培养基表面。
2．用无菌镊子夹取灭菌圆形滤纸片各数张，分别浸于升汞、石炭酸、碘酒和红汞消毒剂内，再——取出，分别放在已接种细菌的琼脂平皿表面的中央及四周，各纸片间的距离要大致相等。
3．37℃培养24小时后，观察各消毒纸片周围有无抑菌圈，以及比较各抑菌圈的大小。
二、石炭酸对不同细菌的杀菌试验
不同化学消毒剂对细菌的杀灭能力各不相同，而同一化学消毒剂对不同细菌的作用效果也不一致。一般而言，具有芽胞的细菌，对消毒剂的抵抗能力要比不能形成芽胞的细菌强。
材料
1．菌种：大肠杆菌肉汤18～24小时培养物、枯草杆菌肉汤18～24小时培养物。
2．培养基：肉汤培养基。
3．2％石炭酸管、生理盐水管、吸管等。
方法
1．用吸管吸取大肠杆菌菌液O．2毫升，将0．1毫升加于2％石炭酸管，另O．1毫升加至生理盐水管，混匀。同法加枯草杆菌菌液至另一石炭酸及生理盐水管中。滴加菌液时，应直接滴人消毒剂内，勿使部分菌液悬挂在管壁而未与药液接触，以致得出错误结果。
2．分别经5、10、20及40分钟后，自接种有不同细菌的石炭酸管内各取一接种环液体接种至肉汤培养基内。在40分钟时，从生理盐水管取一接种环液体接种至肉汤培养基中。
3．将全部10支接种过的肉汤管放37℃培养24小时，观察杀菌情况。
三、不同浓度酒精的杀菌试验
酒精的杀菌作用是酒精使细菌菌体蛋白脱水而变性凝固。浓度高于70％～80％的酒精，可能因脱水过快，使细菌体表迅速凝固，影响酒精继续渗入，故杀菌效能反而降低。
材料
1．菌种：已干燥的沾有葡萄球菌的滤纸条(5mm×15mm)。
2．培养基：肉汤培养基。
3．30％、50％、75％及95％的酒精溶液、镊子等。
方法
1．用无菌镊子夹取沾有干燥的葡萄球菌滤纸条，分别投入不同浓度的酒精溶液管中，每一管中放三条，肉汤管中放一条，作对照用。
2．经5、15及30分钟后，分别从不同浓度酒精管内取出1条滤纸片，投入肉汤管中。
3．将所有的接种肉汤管置37℃培养24小时，观察杀菌情况。
思考题
1．为什么芽胞对理化因素抵抗力较繁殖体强?
2．如何证明抑茵圈内的细茵是被抑制，还是被杀灭?
(刘斌波)
实验十二细菌对抗生素的
药物敏感试验
各种致病细菌对化学药物、抗生素等敏感性各异，即使同一种细菌的不同菌株对不同药物的敏感性也常发生改变，甚至出现耐药菌株，亦即产生耐药性变异。因此，测定细菌对药物的敏感程度，对于临床治疗中选择用药，及时控制感染具有重要意义。
常用方法有纸片弥散法和试管稀释法。
实验目的
了解细菌对药物敏感试验的操作方法和判断。
实验项目
一、纸片法
材料
1．菌种：1号、2号金黄色葡萄球菌16～18小时肉汤培养物、痢疾杆菌16～18小时肉汤培养物。
2．培养基：普通琼脂平皿培养基。
3．药物纸片：青霉素、链霉素、氯霉素、庆大霉素纸片。
4．其他：无菌棉棒、镊子、酒精缸等。
方法
1．用灭菌棉棒分别沾取金黄色葡萄球菌1号和2号及痢疾杆菌肉汤培养物，分别涂布在琼脂表面，每种菌涂一个平皿(沾菌棉棒用后，放入消毒缸中，勿乱丢)。
2．用小镊子沾酒精烧灼消毒，待冷后镊取一种药物纸片，贴在涂有细菌的平皿上，然后将镊子再沾酒精烧灼后，镊取另一种药物纸片，贴布于琼脂平皿另一处，如此将几种药物纸片贴完，各纸片距离要大致相等。
3．将已做好的药敏琼脂平皿，置37℃培养18～24小时，观察各药物纸片的抑菌效果。即观察药物纸片周围有无抑菌圈，如有，在平皿底面用尺量其直径大小，测定药物敏感程度。各种抗生素抑菌圈直径与敏感标准见表12-1。
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