中国植物病理学会2018年学术年会论文集

**部分真菌 Nitrate reductase required for sclerotial development and virulence formation in Sclerotinia sclerotiorum基金项目：公益性行业（农业）科研专项（201103016） Pan Yuemin，Wei Junjun，Jiang Bingxin,Gao Zhimou通信作者：高智谋，教授，主要研究方向为真菌学及植物真菌病害；Email：gaozhimou@126com (College of Plant Protection，Anhui Agricultural University，Hefei 230036，China) Abstract:Nitrate reductase is a key enzyme in the process of nitrogen assimilation and is distributed in various organs and tissues of bacteria，fungi，and higher plantsIn order to explore the function of this enzyme during the vegetative growth and pathogenesis of Sclerotinia sclerotiorum，the nitrate reductaseencoding gene of Ssclerotiorum SsNR was cloned and the gene silencing technique was used to analyze the roles of SsNR in SsclerotiorumThe results showed that the growth rate of SsNR mutant colonies slowed down，the number of sclerotia was significantly reduced，the infection cushion was deformed，and the oxalic acidproducing ability was weakenedUnder the influence of chemical stress factors，the transformants were highly sensitive to gongo red，sodium dodecyl sulfate，hydrogen peroxide，and sodium chlorideThe diameters of the colonies were significantly inhibited，and the transformants were only insensitive to sorbitolThe inoculation test on the detached leaves of rapeseed showed that the lesion areas of wildtype strain accounted for 1243％1366% of the entire leaf areaThe analysis of expression level of pathogenicity related genes showed that the expressions of Ggt1，Sac1，and Smk3 genes were downregulated and the expressions of Ubq and Cyp genes were upregulatedThe above results indicated that SsNR played a critical role in the vegetative growth，sclerotia development，the formation of infection cushion，and pathogenesis of Ssclerotiorum Key words：Sclerotinia sclerotiorum；Nitrate reductase；Sclerotium；Pathogenicity Nitrate reductase is required for sclerotial development and virulence of Sclerotinia sclerotiorum Pan Yuemin1These authors contributed equally to this work，Wei Junjun1*，Yao Chuanchun2，Yang Guogen1，Gao Zhimou1Corresponding author:Gao Zhimou;Email：gaozhimou@126com (1Department of Plant Pathology，College of Plant Protection， Anhui Agricultural University，Hefei 230036，China; 2Anhui Academy of Agricultural Sciences，Hefei 230036，China) Abstract:Sclerotinia sclerotiorum(Lib)de Bary is a necrotrophic pathogen which causes disease on many crops including rapeseed，soybean，sunflower，peanut，and other important economic cropsSclerotinia stem rot(SSR)is one of the most important diseases on rapeseed in China，which causes significant yield losses and economic damage threaten to oil cropproductionHere，we characterized a nitrate reductase(SsNR)that play important roles in mycelia growth，sclerotia development and virulenceSsNR is highly expressed during sclerotial developmentSsNRsilenced mutants showed abnormal in mycelia growth with short and branched tip，imperfect in sclerotia formation，and reduced virulence on rapeseed and soybean with abnormal in infection cushions formation and decreased in oxalic acid productionSsNRsilenced mutants are more sensitive to abiotic stress including Congo Red，SDS，H2O2 and NaCl except sorbitolThe expression level of pathogenicity related genes SsGgt1，SsSac1，and SsSmk3 are downregulated while SsUbq and SsCyp are upregulated in SsNRsilenced mutantsThese results indicate that SsNR is important for Ssclerotiorum during growth and infection 安徽蚌埠和砀山地区小麦白粉菌自然群体的 DNA分子多态性分析基金项目：国家自然科学基金（31401684）；公益性行业（农业）科研专项（201503130）；安徽省科技重大专项（17030701050） 宛琼**作者：宛琼，女，讲师，主要从事植物病害流行学研究；Email：wanqiong_8689@163com,曹志强,齐永霞,陈莉通信作者：丁克坚，教授，主要从事植物病害流行和综合治理研究；Email：zbd@ahaueducn 陈莉，副教授，主要从事植物病害流行和综合治理研究；Email：Chenli31029@163com,丁克坚,张承启 （安徽农业大学植物保护学院，合肥230036） 摘要： 小麦白粉病是由布氏白粉菌（Blumeria graminis fsptritici）引起的一种小麦重要病害。安徽北部为该省小麦主要种植区，也是小麦白粉病发生的重要范围。本研究探讨了安徽北部的蚌埠和砀山地区小麦白粉菌自然发病群体的AFLP分子多态性特点。研究结果将为了解安徽蚌埠和砀山地区的小麦白粉菌群体遗传多样性特点及该病害的流行预测提供理论支持。 本研究分析了安徽省蚌埠（32个）和砀山（18个）地区共50个不同小麦白粉菌单孢堆菌株的AFLP分子多态性。结果显示，这50个小麦白粉菌所构成的总群体的Neis基因多样性指数（H）为028，Shannon多样性指数（I）为045，表明其具有丰富的遗传多样性。蚌埠和砀山地区小麦白粉菌群体的Neis基因多样性指数分别为028和026，Shannon多样性指数（I）分别为044和042，故蚌埠群体的遗传多样性水平略高于砀山群体，但总的来说，这两个群体均有着丰富的遗传多样性。两群体间遗传距离很小（0015 9），遗传分化程度很低（遗传分化系数Gst=0020 3），且很高的基因流（Nm=24112 9）进一步表明两地区群体间存在着非常广泛的基因交流。分子方差分析（AMOVA）结果表明，蚌埠和砀山地区小麦白粉病菌群体内部遗传变异占总变异的100%，群体间遗传变异占总变异的0%，表明两群体的遗传变异均来源于群体内部。蚌埠和砀山小麦白粉菌群体的基因型多样性分别为050和044，表明两群体均存在丰富的基因型多样性，为50%左右。综上所述结果表明，安徽蚌埠和砀山地区小麦白粉菌自然群体均具有丰富的遗传多样性，且两群体间亲缘关系很近，其遗传变异均来源于群体内部。 关键词：小麦白粉病；基因多样性；遗传分比 海南橡胶树棒孢霉落叶病病原鉴定与毒素蛋白分析 曲建楠1**作者：曲建楠，硕士研究生，主要从事分子植物病理学研究；Email：18345638704@163com，崔佳1，刘震2，缪卫国2，陈迪2，左豫虎1通信作者：左豫虎，教授，博士生导师，主要从事植物病理学研究；Email：zyhu@163com 刘铜，教授，博士生导师，主要从事植物病理学和生物防治研究；Email：liutongamy@sinacom，刘铜2 （1黑龙江八一农垦大学，大庆163319；2海南大学热带农林学院，海口570228） 摘要： 由多主棒孢（Corynespora cassiicola)引起的巴西橡胶树棒孢霉落叶病是我国橡胶产区的一个重要病害。为了更加明确海南橡胶树棒孢霉落叶病菌的类型，2017年4—11月在海南省澄迈县、儋州市、白沙黎族自治县、五指山市、乐东黎族自治县和保亭黎族苗族自治县6个地区采集了300余份橡胶棒孢霉落叶病病叶，对其病原菌进行分离、纯化及病原菌的鉴定。经分离纯化共获得35株菌株，所有菌株在PDA平板上菌落呈黑灰色，边缘灰白色，菌丝生长量缓慢，产孢较少，部分菌株在背面可以产生红褐色同心轮纹。对其产孢条件分析发现病菌在菌丝断裂后，通风光照培养3d可以刺激其产孢，分生孢子呈倒棍棒或圆柱状，直立或稍弯曲，橄榄色至深褪色，具有3～20个假隔膜。通过对ITS、微管蛋白βtubulin、延伸因子TEF1基因扩增和序列分析，结合形态学观察，35株菌株均为多主棒孢菌。根据柯赫氏法则对所有菌株进行微伤口接种到橡胶RRIM600健康嫩叶上，10d后均出现明显的“鱼骨”状坏死斑。通过对毒素蛋白检测，所有菌株均检测出Cas5毒素基因，未检测出其他毒素蛋白，由此推测海南省橡胶树棒孢霉落叶病菌为Cas5亚型。目前,关于病原菌的致病性、遗传多样性、Cas5基因表达模式和其致病机理正在研究中。 关键词：橡胶树棒孢落叶病；多主棒孢菌；Cas5亚型；致病性 小豆与豇豆单胞锈菌互作的蛋白质组学分析基金项目：国家自然科学基金（31501629）;黑龙江省青年创新人才（UNPYSCT-2016201，UNPYSCT-2017113） 张金鹏**作者：张金鹏，硕士研究生，研究方向为植物病理学；Email：980413217@qqcom，杨阳，康静，殷丽华，柯希望，左豫虎通信作者：左豫虎，教授，主要从事植物病理学研究；Email：zyhu@163com （黑龙江八一农垦大学农学院植保系，大庆163319） 摘要：由豇豆单胞锈菌（Uromyces vignae）引起的小豆锈病，是严重影响小豆产量及品质的重要病害，明确小豆抗锈病基因，深入探索小豆抗锈病的分子机理，将为抗病品种培育及利用抗病基因防治病害提供重要参考。因此，本研究在鉴定获得高抗锈病小豆资源的基础上，采用iTRAQ定量蛋白组学技术分析了小豆抗病品种响应锈菌侵染不同时期的差异表达蛋白，结果表明，接种后24 h（气孔下囊形成）、48 h（吸器形成）及120 h（花斑期）鉴定共获得154个差异表达蛋白。差异蛋白功能注释表明，接种后24 h活性氧代谢相关基因SOD、POD显著上调表达，接种后48 h和120 h抗病相关蛋白PR2、PR3、PR4、PR5及DIR22等显著上调表达。进一步的GO和KEGG富集分析发现，接种后24 h活性氧代谢及次级代谢物合成通路显著富集，接种后48 h差异蛋白主要富集于基因表答调控及类黄酮生物合成途径，接种后120 h显著富集的GO条目包括防卫反应、先天免疫反应，显著富集的代谢通路包括类黄酮生物合成、异黄酮生物合成、苯丙烷生物合成等。上述结果暗示小豆抗病品种对锈菌的抗性可能依赖于活性氧对下游防卫反应相关基因的激活效应。本研究通过比较分析病菌侵染不同阶段的差异表达蛋白，初步明确了参与小豆抗锈病关键基因及其可能的机制，对克隆抗锈病相关基因及利用抗病基因改良小豆资源的抗锈性具有重要意义。 关键词：小豆；小豆锈病；豇豆单胞锈菌；蛋白质组学；抗病基因 烟田周边植物白粉病菌的分子鉴定及 烟草白粉病菌寄主范围的研究基金项目：贵州省科技厅优秀青年人才培养计划（黔科合平台人才[2017]5619）；中国烟草总公司贵州省公司科技项目（201603，201711，201714） 向立刚1,2**作者：向立刚，硕士研究生，主要从事烟草病虫害防治技术研究;Email：1475206901@qqcom，崔梦娇2，3，汪汉成2，陈兴江2，陈雪4通信作者：陈雪，高级农艺师，主要从事烟草植物保护方面的研究;Email：248366944@qqcom 汪汉成，博士，研究员，主要从事植物保护和微生物学方面研究;Email：xiaobaiyang126@hotmailcom ，代园凤4，余知和1 （1长江大学生命科学学院，荆州434025；2贵州省烟草科学研究院，贵阳550081； 3长江大学农学院，荆州434025；4贵州省烟草公司毕节市公司，毕节551700） 摘要：烟草是一种重要的经济作物，广泛种植于我国各个省份。烟草白粉病的发生可造成烟叶质量的大幅下降，严重时可引起植株全株死亡。目前,国内外尚缺乏对烟草白粉病菌寄主范围的系统性研究。本文对引起烟草白粉病的二孢白粉菌(Erysiphe cichoracearum DC又为Golovinomyces cichoracearum var)开展贵州烟区其寄主范围的研究，以期获得烟草白粉病菌的寄主种类。研究结果表明，烟草生产季节在烟田周边共采集获得15种植物白粉病样品，包括菊科大丽花（Dahlia pinnata Cav）、百日菊（Zinnia elegans Jacq）、翅果菊［Pterocypsela indica(L)Shih］、藿香蓟（Ageratum conyzoides L）、金鸡菊（Coreopsis drummondii Torret Gray），旋花科打碗花（Calystegia hederacea Wal），伞形科天胡荽（Hydrocotyle sibthorpioides），苏木科双荚决明（Cassia bicapsularis Linn），禾本科牛筋草［Eleusine indica(L)Gaertn］，玄参科阿拉伯婆婆纳（Veronica persica Poir），蓼科酸模（Rumex acetosa L），小檗科十大功劳（Mahonia），马桑科马桑（Coriaria nepalensis Wall），杜鹃花科杜鹃（Rhododendron simsii Planch），及车前科车前草（Plantago asiatica L）。基于引物ITS1F和ITS4扩增的真菌ITS序列的分析表明，大丽花、阿拉伯婆婆纳、车前草上的病原菌为二孢白粉病菌（Gcichoracearum）；百日菊、藿香蓟、金鸡菊、翅果菊上的病原菌为中国长春瓜类白粉菌（Podosphaera xanthii）；打碗花的病原菌为双叉旋花白粉菌（Erysiphe convolvuli）；天胡荽的为（Podosphaera aphanis）；杜鹃的为（Erysiphe betae）；牛筋草的为（Blumeria graminis）；双荚决明的为（Oidium neolycopersici）；酸模的为（Erysiphe polygoni）；十大功劳的为十字花科白粉菌（Erysiphe cruciferarum）；马桑的为（Erysiphe sp）。以菊科大丽花、翅果菊、藿香蓟、金鸡菊、野茼蒿［Crassocephalum crepidioides(Benth)SMoore］、蒲公英（Taraxacum mongolicum HandMazz）、苣荬菜（Sonchus brachyotus DC）、苦苣菜（Sonchus oleraceus L）、牛膝菊（Galinsoga parviflora Cav）、一年蓬［（Erigeron annuus(L)Pers（Aster annuus L）］、艾草（Artemisia argyi HLév& Vaniot），车前科车前草，凤仙花科凤仙花（Impatiens balsamina L），旋花科打碗花，伞形科天胡荽，苏木科双荚决明，禾本科牛筋草，玄参科阿拉伯婆婆纳，蓼科酸模，小檗科紫叶小檗和十大功劳，马桑科马桑，酢浆草科三叶草（Trifolium repens L），蔷薇科月季（Rosa chinensis Jacq），大戟科铁苋草（Acalypha australis L），及茄科番茄（Solanum lycopersicum）共计26种植物叶片为材料，科赫氏法则回接烟草白粉病菌并进行病菌分子鉴定。结果表明，阿拉伯婆婆纳、车前草、大丽花3种植株的白粉病菌与烟草白粉病菌相同。为此，烟草白粉病在贵州烟田的转主寄主包括大丽花、车前草、阿拉伯婆婆纳，烟草白粉病防治时也应同时对这些寄主植物上的白粉病进行防治。 关键词：白粉病；二孢白粉菌；烟草；寄主范围