缺氧诱导小分子RNA调控肾癌侵袭转移的分析与研究/同济博士论丛

总序
论丛前言
前言

第1章 GEO中肾透明细胞癌高通量测序数据库的生物信息学分析
1．1 概述
1．2 疾病相关的基因芯片数据库发掘临床肿瘤新标靶

第2章 人肾透明细胞癌中的miRNA表达谱芯片检测及靶基因分析
2．1 材料与方法
2．1．1 实验设备及主要仪器
2．1．2 主要实验试剂及试剂盒
2．1．3 miRNA芯片实验方法
2．2 miRNA芯片数据的分析方法
2．2．1 差异miRNA的筛选
2．2．2 基因功能的显著性分析（G0-Analysis）
2．2．3 基因通路的显著性分析（Pathway-Analysis）
2．3 结果
2．3．1 肾癌标本临床及病理资料
2．3．2 miRNA芯片实验结果和热图分析
2．3．3 肾癌标本中差异miRNAs的靶基因分析
2．3．4 肾癌标本中差异靶基因的显著性功能分析（GO Analysis）
2．3．5 肾癌标本中差异基因的显著性pathway分析和其调控网路分析
2．4 讨论
2．5 结论

第3章 肾透明细胞癌组织中miR-646、相关基因检测及其与肿瘤患者临床相关因素分析
3．1 材料
3．1．1 临床样本
3．1．2 实验用试剂
3．1．3 实验用仪器
3．2 方法
3．2．1 miRNA荧光定量PCR操作流程
3．2．2 靶基因NOBl和SLC4Al检测
3．2．3 靶基因NOBl和SLC4A1的蛋白表达水平检测（Western blot）
3．2．4 免疫组织化学检测NOBl蛋白表达
3．2．5 统计分析方法
3．3 结果
3．3．1 肾透明细胞癌中miR-646和NOBl的表达情况和单变量和多变量风险模型分析
3．3．2 不同级别肾透明细胞癌中NOBl的表达情况及其与临床病理特征的关系
3．4 讨论
3．5 结论

第4章 miR-646靶基因验证及其在肾透明细胞癌中的作用及机制研究
4．1 材料和仪器
4．1．1 细胞系及动物模型
4．1．2 细胞培养基质粒抽提相关试剂盒
4．1．3 实验主要仪器
4．2 方法
4．2．1 靶基因双荧光素酶活性检测
4．2．2 转染后肾癌细胞系和293T细胞中miR-646和相关因的表达水平检测
4．2．3 转染miR-646后肾透明细胞癌细胞增殖影响的检测（MTT法）
4．2．4 转染miR-646后肾透明细胞癌细胞迁移的检测（Wound healing法）
4．2．5 转染miR-646后肾透明细胞癌细胞凋亡的检测（FACS）
4．2．6 转染miR-646后肾透明细胞癌细胞侵袭的检测（Transwell小室）
4．2．7 血管生成实验（．Angiogenesis），体外条件下肾细胞癌细胞与HUVE（人脐带血内皮细胞）共培养检测血管形成能力
4．2．8 蛋白质芯片检测miR-646对肾透明细胞癌细胞的下游靶基因及通路的相关蛋白表达变化
4．2．9 小鼠成瘤实验检测miR-646和NOBl-shRNA对肾癌细胞裸鼠体内成瘤性的影响
4．3 结果
4．3．1 786-0、ACHN和Caki-2肾癌细胞株中miR的表达水平
4．3．2 miR-646靶基因生物信息学预测
4．3．3 293-T细胞中miR-646靶向调控NOBl的双荧光素酶活性的检测
4．3．4 肾透明细胞癌中过表达或干扰miR-646后对靶基因NOBl基因和蛋白表达的影响
4．3．5 miR-646对肾癌细胞增殖和细胞周期的影响
4．3．6 miR-646对肾癌细胞迁移和侵袭功能的影响
4．3．7 细胞克隆实验检测miR-646对肾癌细胞增殖生长的影响
4．3．8 体外血管生成实验（Angiogenesis）检测miR-646对肾癌细胞血管形成影响
4．3．9 体内实验进一步验证体外细胞功能实验：miR-对肾癌细胞裸鼠成瘤性的影响
4．3．10 miR-646可直接靶向NOBl基因，间接影响SLC4A1基因的表达水平
4．3．11 miR-646靶向NOBl基因对MAPK通路的调控机制
4．4 讨论
4．5 小结

第5章 总结与展望
5．1 结论
5．2 进一步工作的方向
参考文献
后记
附录综述