动物细胞培养技术

**章绪论001
**节动物细胞培养发展简史001
第二节细胞培养的特点与应用003
一、细胞培养的特点003
二、细胞培养技术的应用研究005
第三节细胞培养生物学008
一、体外培养细胞与体内细胞的差异与分化008
二、体外培养细胞的类型009
三、体外培养细胞的生长与增殖过程012
四、细胞周期017
第四节细胞培养条件与影响因素020
一、无菌环境020
二、细胞分离方法021
三、细胞培养温度022
四、细胞培养基的成分022
五、接种密度023
六、培养基的pH值024
七、细胞的冻存与复苏024
八、附着底物025
九、细胞供体年龄027

第二章培养用液与培养基028
**节培养基的基本性质028
一、营养成分028
二、pH值030
三、渗透压030
四、缓冲能力030
五、促生长因子及激素031
六、无毒、无污染031
第二节水和平衡盐溶液032
一、水032
二、平衡盐溶液032
第三节天然培养基034
一、血清034
二、血浆039
三、鸡胚浸出液040
四、水解乳蛋白041
五、胶原042
第四节合成培养基043
一、基本组分043
二、常用细胞培养基046
第五节细胞培养其它常用液053
一、平衡盐溶液（Balanced salt solution，BSS）053
二、消化液053
三、pH调整液055
四、抗生素055
五、谷氨酰胺补充液056
六、二肽谷氨酰胺（L-丙氨酰-L-谷氨酰胺）056

第三章培养用设施与设备处理057
**节细胞培养实验室057
一、无菌操作区058
二、孵育区062
三、制备区062
四、储藏区062
五、清洗和消毒灭菌区062
第二节细胞培养用仪器及设备062
一、CO2培养箱063
二、超净工作台/生物安全柜063
三、纯水系统063
四、细胞冷冻储存器064
五、冰箱065
六、恒温水浴065
七、离心机066
八、显微镜066
九、高压蒸汽灭菌器066
十、电热烘干箱067
十一、特殊设备067
第三节细胞培养用器械及器皿068
第四节培养用品的处理071
一、培养用品的清洗071
二、包装075
三、消毒灭菌076
四、消毒方法的选择081

第四章原代细胞培养技术083
**节原代培养基本知识083
一、原代细胞的分离方法084
二、原代细胞的纯化方法086
三、原代细胞培养086
四、原代细胞的生物学鉴定086
五、注意事项087
第二节上皮组织细胞的培养089
一、试剂与器材090
二、原代细胞的分离和纯化090
三、肠上皮细胞的鉴定092
四、注意事项093
第三节结缔组织细胞的培养094
一、疏松结缔组织095
二、致密结缔组织095
三、脂肪组织095
四、网状组织096
五、鸡成纤维细胞的原代培养096
第四节肌组织细胞的培养100
一、骨骼肌100
二、平滑肌101
三、心肌101
四、骨骼肌卫星细胞的培养101
第五节神经组织细胞的培养104
一、神经细胞的原代培养105
二、神经细胞组织的培养105
三、神经细胞原代培养的意义108
第六节干细胞的培养109
一、干细胞的分类109
二、胚胎干细胞的培养110
三、成体干细胞的培养114

第五章细胞建系、传代培养技术118
**节正常细胞系的建立和鉴定118
一、细胞系的建立118
二、细胞系的鉴定119
第二节癌细胞系的建立和鉴定121
一、细胞系的建立121
二、细胞系的鉴定122
第三节传代培养基本知识122
一、传代培养的过程124
二、Vero细胞的培养128
三、HeLa细胞的培养131
第四节传代细胞的大规模培养133
一、悬浮规模培养134
二、单层规模培养134
三、动物细胞大规模培养的方法135
四、动物大规模培养技术的应用144
五、动物细胞生物反应器145
六、大规模培养技术的操作方式149

第六章动物细胞的冻存、复苏及污染检测157
**节动物细胞冻存157
一、冻存的必要性157
二、冷冻保存的原理158
三、影响冻存细胞活性的因素159
四、细胞冻存方法162
第二节动物细胞复苏167
一、细胞复苏的原理167
二、细胞复苏的方法168
三、细胞复苏的要点169
第三节细胞培养污染检测170
一、可见微生物污染检测170
二、支原体检测171
三、病毒污染检测171

第七章细胞融合与单克隆抗体技术173
**节单克隆抗体的概念173
第二节杂交瘤技术的诞生174
第三节单克隆抗体的制备176
一、动物免疫177
二、细胞融合180
三、杂交瘤细胞筛选186
四、杂交瘤细胞的克隆化197
五、杂交瘤细胞的冻存与复苏199
六、单抗特性的鉴定201
第四节单克隆抗体的生产208
一、动物体内生产单抗的方法208
二、体外培养生产单抗的方法209
三、杂交瘤细胞的无血清培养211
第五节单克隆抗体的纯化212
一、腹水型单抗的纯化212
二、单抗的粗提213
第六节单克隆抗体的标记215
一、酶标记215
二、荧光素标记219
三、同位素标记220
四、生物素标记222
五、其它标记技术223

附录224
一、常用的动物细胞系224
二、细胞培养常用术语228
三、细胞培养常用缩写词237
四、常用培养基成分和配方239
五、细胞计数（台盼蓝细胞染色计数）248
六、细胞生长曲线的绘制250

参考文献253