分子生物学实验

**部分分子生物学实验基础知识 第1章分子生物学实验室规则和安全/2 1.1实验室一般规则/2 1.2实验室常识/2 1.3实验室安全基础知识/3 1.4实验室合理设计和布局/4 1.5实验室急救/4 1.6废弃物、放射性物质及有毒物质的处理/5 第2章分子生物学实验常用仪器设备及其操作/7 2.1分子生物学实验常用仪器设备/7 2.2冷冻离心机/8 2.3电泳仪/9 2.4分析天平/10 2.5分光光度计/10 2.6数字式酸度计/11 2.7PCR仪/12 2.8凝胶成像系统/13 2.9摇床/13 2.10水的净化装置/14 2.11消毒设备/15 第3章细菌培养常用培养基和抗生素溶液的配制方法/17 3.1常用培养基的配制方法/17 3.2常用抗生素溶液的配制方法/18 第4章GenBank数据库简介/20 4.1概述/20 4.2GenBank的建立与发展/20 4.3GenBank的检索/22 4.4GenBank数据库结构/23 第二部分分子生物学常用实验技术 第5章核酸的制备/32 5.1核酸制备的原理与方法/32 5.2质粒的生物学特性/35 5.3常用克隆载体的特征/37 实验1真核生物基因组DNA提取/38 实验2总RNA的提取及鉴定/40 实验3质粒DNA的微量提取和鉴定/44 第6章DNA的酶切和凝胶电泳/47 6.1限制性核酸内切酶的特性及应用/47 6.2琼脂糖凝胶电泳/49 6.3聚丙烯酰胺凝胶电泳/51 实验4DNA的限制性核酸内切酶酶切及凝胶电泳/53 第7章DNA转化/57 7.2转化/57 实验5大肠杆菌感受态细胞的制备和转化/59 分子生物学实验目录第8章DNA重组的基本流程和方法/64 8.1目的基因的获取/64 8.2DNA分子的体外重组/65 8.3DNA重组体的导入/66 8.4受体细胞的筛选/68 8.5基因表达/69 实验6DNA片段的黏端连接法/70 实验7DNA片段的黏平端连接法/71 实验8重组子的筛选与鉴定/73 第9章聚合酶链式反应技术/76 9.1常规PCR技术的原理及操作/76 9.2引物设计原则及合成/80 9.3PCR产物的纯化与鉴定/81 实验9PCR扩增特异性DNA片段及扩增产物的纯化与鉴定/83 第10章核酸杂交技术/86 10.1几种核酸探针标记方法/86 10.2核酸探针制备和纯化技术/89 实验10核酸探针制备和纯化/97 实验11菌落原位杂交法/99 第三部分分子生物学综合性、研究性实验 第11章外源基因的表达/104 11.1外源基因在原核生物中的表达/104 11.2外源基因在酵母细胞中的表达/111 实验12外源基因在大肠杆菌中的诱导表达/116 实验13SDSPAGE电泳检测表达的外源蛋白/117 实验14脂肪酶基因在枯草杆菌中表达及表达产物的研究/119 实验15外源基因在酵母细胞中表达及表达产物的研究/121 第12章利用分子生物学技术进行细菌的种属鉴定/123 12.1微生物分类鉴定方法的发展/123 12.216S rDNA分类鉴定技术的原理/124 实验16利用16S rDNA序列分析技术进行细菌种属的鉴定/125 第13章基因表达差异的分析/130 13.1差减杂交/130 13.2mRNA差异显示技术/131 13.3cDNA示差分析/131 13.4差减抑制杂交方法/132 实验17半定量RTPCR技术检测基因的表达差异/133 附录/138 附录A常用单位及换算方法/138 附录B常用核酸、蛋白质换算数据/138 附录C核酸的单位及有关数据/139 附录D常见核酸分子的长度和相对分子质量/139 附录E色素在聚丙烯酰胺凝胶中的移动参数/140 参考文献/141