基因工程实验指导-(第3版)

实验计划表
导论
**节 基因工程的四大要素
第二节 基因克隆的策略

1 核酸的提取与检测
1-1 基因组DNA的提取
1-2 总RNA和mRNA的提取
1-3 噬菌体DNA的提取
1-4 质粒DNA的提取
1-5 核酸的检测
1-6 脉冲场凝胶电泳
1-7 宏基因组文库的构建

2 靶基因的获取
2-1 PCR扩增
2-2 目的基因片段的获取
2-3 探针的标记及检测
2-4 核酸探针筛选基因文库
2-5 反转录PCR
2-6 RACE方法
2-7 反向PCR
2-8 SiteFinding-PCR
2-9 功能基因的活性筛选

3 基因定点突变、沉默与敲除
3-1 基因定点突变
3-2 基因沉默技术
3-3 酵母基因的敲除
3-4 哺乳动物基因的敲除
3-5 植物基因的敲除

4 质粒的重组
4-1 T-A克隆
4-2 感受态细胞的制备
4-3 重组质粒的转化
4-4 阳性克隆的筛选
4-5 DNA序列测定与序列同源性分析

5 原核表达系统的构建与诱导表达
5-1 DNA的酶切反应
5-2 靶DNA片段的分离纯化
5-3 DNA片段的连接
5-4 表达质粒的构建
5-5 Soulhern印迹
5-6 靶基因的诱导表达
5-7 SDS-PAGE

6 真核表达系统的构建与表达
6-1 外源基因在酵母中的表达
6-2 外源基因在哺乳动物细胞中的表达
6-3 外源基因在植物细胞中的表达
6-4 qRT-PCR分析
6-5 Nor-thern印迹
6-6 Western印迹
6-7 荧光原位杂交

7 蛋白质的分析与目标产物分离
7-1 免疫荧光与激光共聚焦
7-2 双向电泳
7-3 酵母双杂交
7-4 蛋白质浓度的测定
7-5 亲和层析

参考文献
附录1 名词缩写
附录2 实验操作及仪器使用注意事项
附录3 如何撰写实验报告
附录4 常用碱基、氨基酸符号及缓冲液
附录5 大肠杆菌基因型
附录6 实验仪器