细胞培养技术-(第二版)-含学习工作手册

**部分动物细胞培养

动物细胞培养概述2

一、动物细胞培养的基本概念及优缺点2

二、动物细胞培养发展史4

三、动物细胞培养的应用6

四、动物细胞培养工作的基本要求和工作方法8

【难点自测】9

项目一VERO细胞的传代培养10

【项目介绍】10

一、项目背景10

二、学习目标10

三、项目任务10

【项目实施】10

任务一VERO细胞培养前的准备10

·**知识11

一、培养细胞的生长条件11

二、动物细胞培养设备14

三、动物细胞培养用品18

四、动物细胞培养用液25

五、动物细胞培养常用的消毒和无菌处理方法31

·操作规程34

一、动物细胞培养常用设备的使用34

二、动物细胞培养用品的清洗、包装和灭菌36

三、动物细胞培养用液的配制和无菌处理39

四、动物细胞培养的无菌操作41

任务二VERO细胞的传代和观察43

·**知识43

一、动物细胞传代培养技术43

二、培养细胞的细胞生物学45

三、培养细胞的观察和检测技术52

·操作规程58

一、VERO细胞的传代培养58

二、VERO细胞的常规观察59

任务三VERO细胞的冻存和复苏60

·**知识60

一、细胞的冻存60

二、细胞的复苏61

三、细胞活性检查61

四、细胞计数62

· 操作规程63

一、VERO细胞的冻存63

二、VERO细胞的复苏64

三、VERO细胞的活性检查65

【项目拓展知识】66

一、动物细胞培养实验室的设计与布局66

二、动物细胞培养的其他常用液67

三、培养细胞的运输和短期保存68

【项目难点自测】69

项目二鸡胚成纤维细胞的原代培养71

【项目介绍】71

一、项目背景71

二、学习目标71

三、项目任务71

【项目实施】71

任务一组织块法培养鸡胚成纤维细胞71

·**知识71

一、培养细胞的取材72

二、组织块培养法73

·操作规程74

一、操作用品74

二、操作步骤75

任务二消化法培养鸡胚成纤维细胞76

·**知识76

一、组织材料的分离76

二、消化培养法77

·操作规程78

一、操作用品78

二、操作步骤78

【项目拓展知识】79

一、正常组织细胞的培养79

二、肿瘤细胞培养82

【项目难点自测】85

项目三CHO细胞的大规模培养87

【项目介绍】87

一、项目背景87

二、学习目标87

三、项目任务87

【项目实施】88

·**知识88

一、动物细胞大规模培养技术概述88

二、动物细胞大规模培养的方法89

三、动物细胞培养反应器96

四、动物细胞大规模培养技术的操作方式100

·操作规程101

【项目拓展知识】105

一、植物细胞大规模培养技术的概念105

二、植物细胞大规模培养的应用和工业前景105

三、植物细胞大规模培养流程107

四、植物细胞的规模化培养体系的建立107

五、植物细胞的大规模培养方法109

六、植物细胞生物反应器111

【项目难点自测】113

项目四抗人血白蛋白杂交瘤细胞系的制备115

【项目介绍】115

一、项目背景115

二、学习目标115

三、项目任务115

【项目实施】115

任务一人血白蛋白免疫小鼠的准备115

·**知识115

一、单克隆抗体的概念115

二、杂交瘤技术制备单克隆抗体的基本原理116

三、杂交瘤技术制备单克隆抗体的主要过程116

四、动物免疫116

·操作规程117

一、操作用品117

二、操作步骤117

任务二骨髓瘤细胞和脾细胞的融合118

·**知识118

一、脾细胞、骨髓瘤细胞及饲养细胞的制备118

二、细胞融合和杂交瘤细胞的筛选119

·操作规程121

一、操作用品121

二、操作步骤121

任务三抗人血白蛋白杂交瘤细胞的筛选124

·**知识124

一、酶联免疫吸附法124

二、双向扩散法124

·操作规程125

任务四抗人血白蛋白杂交瘤细胞的克隆培养126

·**知识126

一、有限稀释法127

二、软琼脂平板法127

三、显微镜操作法127

四、荧光激活分离法127

·操作规程128

【项目拓展知识】128

一、杂交瘤技术的诞生128

二、杂交瘤细胞株的冻存和复苏129

三、单克隆抗体的大量制备与纯化129

四、细胞的基因转染技术130

【项目难点自测】132



第二部分植物细胞培养

植物细胞培养概述136

一、植物组织培养136

二、植物细胞培养137

三、植物组织细胞培养的发展史138

四、植物组织细胞培养的应用140

【难点自测】142

项目五胡萝卜细胞的悬浮培养144

【项目介绍】144

一、项目背景144

二、学习目标144

三、项目任务144

【项目实施】145

任务一MS培养基的制备145

·**知识145

一、植物细胞培养的实验室条件145

二、植物细胞培养的培养基150

·操作规程156

任务二胡萝卜愈伤组织的诱导159

·**知识159

一、外植体的选择和预处理159

二、植物愈伤组织培养的形成过程161

三、植物愈伤组织培养的一般程序162

四、植物组织细胞培养的无菌操作163

·操作规程163

任务三胡萝卜细胞的悬浮培养164

·**知识164

一、单细胞的分离164

二、悬浮培养细胞的生长和测定166

三、悬浮培养细胞的同步化167

四、植物细胞培养的环境条件167

·操作规程169

【项目拓展知识】170

一、植物细胞的固定化培养170

二、植物单细胞培养172

【项目难点自测】174



附录细胞培养技术常用术语中英文对照177

参考文献 182