环境微生物学实验方法与技术(王兰)

**部分 基础微生物实验方法与技术
**章 显微技术
**节 常用显微镜的构造
一、普通光学显微镜（general microscope）
二、暗视野显微镜（暗场显微镜）（dark-field microscope）
三、相差显微镜（phase microscope）
四、荧光显微镜（Flurecenee Microscope）
五、电子显微镜
第二节 常用显微镜的使用方法及注意事项
一、普通光学显微镜的使用方法及注意事项
二、暗视野显微镜的使用方法及注意事项
三、相差显微镜的使用方法及注意事项
四、荧光显微镜的使用方法及注意事项
第二章 微生物制片及染色技术
**节 微生物的制片方法
一、压滴标本制作无菌操作制片
二、悬滴标本制作
三、涂片法
四、插片法
五、搭片法
六、玻璃纸法
七、压片法（也称印片法）
八、透明薄膜培养法
九、单细胞菌块
十、其他方法
第二节 微生物染色技术及形态观察
一、染色基本原理及染料种类的选择
实验2.1 细菌单染色法及形态的观察
实验2.2 细菌的革兰染色法
实验2.3 细菌鞭毛染色及运动的观察
实验2.4 细菌芽孢、荚膜的染色及观察
实验2.5 放线菌活体染色及形态观察
实验2.6 霉菌的活体染色及形态观察
第三章 灭菌与除菌
**节 实验室常用灭菌方法
一、热灭菌
二、过滤除菌
三、紫外线杀菌
四、化学药剂消毒与杀菌
第二节 各类培养基常采用的灭菌方法及注意事项
一、各类培养基的灭菌法
二、培养基灭菌的注意事项
第四章 培养基的配制
**节 培养基的配制原则
一、选择适宜的营养物质
二、营养物质浓度及配比合适
三、控制pH值条件
第二节 培养基的种类及配置过程
一、培养基的种类
二、培养基的配制方法
实验4.1 常用培养基的配置
第五章 微生物接种与培养技术
**节 微生物的接种技术
实验5.1 微生物的各种接种方法
第二节 微生物的培养技术
一、微生物培养的一般问题
二、好气性微生物培养法
三、厌气性微生物培养法
实验5.2 用厌氧袋法培养丙酮丁醇梭状芽孢杆菌
第六章 微生物的分离及鉴定技术
**节 微生物的纯种分离方法
一、稀释混合倒平板法
二、稀释涂布平板法
三、平板划线分离法
实验6.1 土壤微生物的分离技术
第二节 微生物生长的测定技术
一、生长测定
二、繁殖测定
三、群体生长规律——生长曲线测定
实验6.2 微生物菌体大小的测定方法
实验6.3 微生物数量的测定
实验6.4 微生物生长曲线的测定
第七章 菌种保藏技术
实验7.1 菌种的保藏方法
第二部分 环境微生物生态学实验方法与技术
第八章 环境因素对微生物生长与死亡的影响
**节 营养和氧气对微生物生长发育的影响
实验8.1 营养元素对微生物生长的影响
实验8.2 氧和C02浓度对微生物生长的影响
第二节 物理和化学因素对微生物生长发育的影响
实验8.3 温度对微生物生长的影响
实验8.4 渗透压对微生物生长的影响
实验8.5 氢离子浓度对微生物生长的影响
实验8.6 化学药剂对微生物生长的影响
第九章 土壤微生物的生物量的测定方法
实验9.1 土壤微生物生物量碳的测定
实验9.2 土壤微生物生物量氮的测定
实验9.3 土壤微生物生物量磷的测定
实验9.4 土壤微生物生物量硫的测定
第十章 微生物多样性的测定方法
**节 PCR技术的基本原理与方法
实验10.1 PCR扩增技术与方法
实验lO.2 微生物总DNA中的16SrDNA PCR扩增技术
实验10.3 凝胶中DNA的回收、测序及系统发育树的构建
第二节 微生物多样性的测定方法
实验10.4 Biolog分析方法
实验10.5 PLFA分析方法
实验10.6 PCR-DGGE分析方法
第三部分 环境微生物监测与评价技术
第十一章 水中微生物监测
**节 水样的采集和保存
一、采样
二、样品保存
第二节 水体中微生物数量的监测
实验11.1 水中细菌总数的监测
实验11.2 水中大肠菌群（Coliform group）的监测
实验11.3 水中粪链球菌的监测
实验11.4 水中病毒的监测
实验11.5 水体沉积物中的H2S产生菌的测定
实验11.6 循环水冷却系统中有关的微生物监测
实验11.7 应用PCR与基因DNA分子探针监测污染水体大肠杆菌
实验11.8 富营养化湖泊中藻类的监测（叶绿素a法）
实验11.9 PFU微型生物群落监测法
第十二章 土壤中微生物的监测
**节 土样的采集及保