液相色谱实践宝典

**章 绪论 1
**节　色谱法的发展历程 1
第二节　液相色谱法分类 2
一、吸附色谱法 3
二、分配色谱法 4
三、离子交换色谱法 7
四、离子色谱法 8
五、离子对色谱法 9
六、排阻色谱法 11
七、常见问题与解答 12
1．固定相或流动相的极性对溶质的保留行为有何影响？ 12
2．化学键合相色谱是什么？有哪些突出的优点？ 13
3．化学抑制型离子色谱和非抑制型离子色谱的区别是什么？ 13
4．离子交换色谱法、离子色谱法、离子对色谱法的区别是什么？ 14
5．各类液相色谱*适宜分离的物质是什么？ 14
6．影响排阻色谱分离效果的因素有哪些？ 15
7．为什么利血平在排阻色谱校正曲线上相对应的分子量要小很多？ 15
8．怎样选择一种合适的分析方法来分离已知目标化合物？ 16
9．超临界流体色谱法有哪些优缺点？ 16
10．为什么不用同一种物质来调节pH值？ 17
11．无机盐对样品中无机物的保留行为有什么影响？ 18
12．怎样选择离子对试剂？ 18
13．反相离子对色谱与阴离子交换色谱有什么异同点？ 19
14．半制备液相色谱和制备液相色谱有什么区别？ 19
15．流动相与样品溶剂不互溶是否可以进样？ 19
16．亲和色谱有哪些用途？ 20
第三节　相关术语和概念 20
一、色谱流出曲线相关名词 20
二、分配系数 22
三、容量因子 23
四、选择因子 23
五、分离度 23
六、常见问题与解答 24
1．梯度洗脱的原理是什么？ 24
2．影响出峰时间的因素有哪些？ 24
3．怎样将目标化合物的保留时间提前？ 25
4．什么是容量因子？如何计算容量因子？ 25
5．怎样通过改变流动相比例来延长保留时间？ 25
6．为什么保留时间总在变化？ 25
7．什么是液相色谱的基线？ 26
8．分离度（R）应大于1.5是指什么？ 26
9．检出限和定量限有什么区别？ 26
10．如何获得检出限？ 27
第四节　动力学过程 28
一、塔板理论 28
二、速率理论 29
三、常见问题与解答 32
1．液相色谱中影响峰扩散的因素有哪些？ 32
2．怎样提高液相色谱的分离度？ 33
3．怎样提高液相色谱柱的柱效？ 34
4．色谱柱直径对峰扩散有哪些影响？ 34
第五节　应用与前景 34
一、重点领域应用情况 34
二、多维色谱技术 35
三、整体色谱柱技术 35
四、衍生化技术 36
五、联用技术 36
六、常见问题与解答 38
1．多维液相色谱的优势有哪些？ 38
2．液相色谱与质谱联用在定性方面有哪些优势？ 39
3．液相色谱与光谱联用技术在形态分析上有哪些优势? 39
4．液相色谱微型化的意义在哪里？ 40
5．液质联用技术能完全替代液相色谱吗？ 40

第二章 液相色谱仪结构简介及故障排除 41
**节　储液器和溶剂过滤器 41
一、储液器 41
二、溶剂过滤器 42
三、常见问题与解答 43
1．为什么流动相使用前要过滤？ 43
2．液相系统中不锈钢管路应避免使用哪些溶剂？ 43
3．怎样防止和处理溶剂过滤器堵塞？ 43
4．怎样解决切换溶剂后系统压力和基线不稳的问题？ 44
5．如果溶剂跑空，气泡会不会进到柱子里？ 44
6．怎样维护液相色谱溶剂过滤器？ 44
7．如何解决溶剂过滤器处气泡排不干净的问题？ 44
8．不锈钢材质与玻璃材质的溶剂过滤器有什么区别？ 45
9．怎样防止流动相中长藻？ 45
第二节　输液泵 45
一、基本要求与分类 45
二、往复式恒流柱塞泵结构与工作原理 47
三、常见的泵模块构造 47
四、维护、故障分析及排除方法 49
五、常见问题与解答 58
1．为什么流动相使用前要脱气？ 58
2．如何判断和排除单向阀故障？ 59
3．如何解决Waters 2695液相色谱仪出现的“solv delivery h/w fault”故障？ 60
4．为什么系统压力会随着测样时间增加而变大？ 60
5．为什么仪器接上色谱柱与不接色谱柱压力基本不变？ 61
6．什么原因导致保留时间和峰面积的重复性不好？ 61
7．如何清洗单向阀？ 62
第三节　进样系统 62
一、基本构造 62
二、进样方式分类 64
三、注意事项 68
四、故障分析及排除方法 69
五、常见问题与解答 70
1．如何更换Ultimate 3000液相色谱注射器？ 70
2．Ultimate 3000液相色谱进样针与定量环如何更换？ 70
3．为什么机械手臂抓住小瓶子进完样品后放不下来？ 71
4．如何使自动进样器弯曲的进样针恢复原状？ 71
5．为什么手动进样只能选择定量环的满环进样或者半环进样？ 71
6．液相手动进样的六通阀与自动进样器的进样阀是否一样？ 72
7．为什么自动进样器进样后样品盘中时常会有液体？ 72
8．怎样解决由进样器污染导致的鬼峰问题？ 72
9．安捷伦自动进样器如何更换进样针？ 73
10．安捷伦自动进样器如何更换进样针座？ 76
第四节　色谱柱 76
一、柱结构 76
二、柱填料 79
三、填料填充技术 82
四、常见色谱柱及其应用范围 83
五、常见问题与解答 83
1．液相色谱柱的分离原理有哪些？ 83
2．如何启用、保管和维护液相色谱柱？ 85
3．如何测试液相色谱柱的柱效？ 85
4．液相色谱柱保护柱有何作用？ 86
5．怎样解决色谱柱导致的系统压力过高的问题？ 87
6．实验结束后如何清洗液相色谱柱？ 87
7．正相色谱柱与反相色谱柱在填料上有什么区别？ 87
8．如何正确使用液相色谱柱？ 88
9．如何正确安装液相色谱柱？ 89
10．液相色谱柱的金属接头与PEEK接头有什么区别？ 90
11．不同品牌色谱柱管线接头是否通用？ 90
12．如何计算色谱柱柱体积？ 91
13．液相色谱柱温与组分分离度有什么关系？ 92
第五节　液相色谱检测器 92
一、检测器分类 92
二、性能指标 94
三、常见检测器 96
四、常见问题与解答 104
1．如何解决示差折光检测器基线容易漂移的问题？ 104
2．怎样冲洗已经堵塞的检测器？ 105
3．二极管阵列检测器、可变波长检测器和紫外可见吸收检测器有什么区别？ 105
4．检测器“光闸不能复位”故障如何排除？ 106
5．基线噪声和检测器噪声的区别是什么？ 107
6．如何维护紫外检测器流通池？ 108
7．液相色谱检测器串联使用时有哪些注意事项？ 108
8．如何解决基线噪声大、基线漂移的问题？ 109
9．什么原因导致做样时总是在同一时间出现倒峰？ 109
10．蒸发光散射检测器热清洗如何操作？ 109
11．二极管阵列检测器基线不稳的原因有哪些？ 110
12．检测器出残留峰如何处理？ 110

第三章 色谱工作站 111
**节　安装与配置 111
一、安装要求 112
二、安装前设置 113
三、工作站软件安装 114
四、配置仪器 114
五、常见问题与解答 115
1．怎样解决安捷伦LC 1260液相色谱工作站许可证错误无法登录的问题？ 115
2．如何处理液相色谱工作站无法通信，停留在驻留模式的问题？ 115
3．如何解决液相色谱工作站显示存在同名仪器的问题？ 116
4．怎样解决工作站磁盘存满导致内存不足，仪器不能正常使用的问题？ 116
5．重新安装工作站软件有哪些注意事项？ 116
6．工作站可否安装杀毒软件？ 117
7．工作站数据多久备份一次为宜？ 118
8．怎样更换老旧工作站安装平台？ 118
9．如何用一台计算机控制多个工作站？ 118
10．如何远程控制工作站？ 118
第二节　常用参数的含义与设定 119
一、数据采集 119
二、数据处理 122
三、常见问题与解答 123
1．如何设置半峰宽、斜率、漂移、*小峰面积等积分参数？ 123
2．液相色谱工作站如何设置梯度洗脱程序？ 124
3．如何使用柱温箱进行控温？ 124
4．如何正确设定参比波长？ 125
5．为何采集数据时的数据信号与后处理时的数据信号有差异？ 125
6．什么是阈值？怎样设定阈值？ 125
7．怎样查看和计算信噪比？ 125
8．信噪比计算中USP、JP、EP等分别代表什么？ 125
第三节　定性与定量 126
一、定性分析 126
二、定量分析 127
三、常见问题与解答 128
1．内标法和外标法各有哪些优缺点？ 128
2．面积归一法定量需要进样量一致吗？ 129
3．如何建立标准加入法的校正曲线？ 129
4．如何对目标化合物进行定性分析？ 129
5．如何选择是用峰高定量还是峰面积定量？ 130
6．为什么在相同的条件下分析结果却不一样？ 130
7．各种曲线拟合方式有哪些区别？ 131
8．工作站中内标物需要怎样设置？ 131
9．单点校正法的适用范围有哪些？ 131
10．标准曲线的*低点及线性范围怎样设置？ 132

第四章 液相色谱样品前处理 133
**节　液固萃取 134
一、直接萃取 134
二、超声萃取 135
三、影响萃取的因素 136
四、常见问题与解答 138
1．超声萃取有哪些优点？ 138
2．农药检测用的乙醚该如何除去过氧化物？ 139
3．常见的固体提取方式有哪些？ 139
4．振荡和超声哪个萃取效率更高？ 140
5．EPA3550 关于超声萃取的方法中为什么要用无水硫酸钠？ 141
6．超声萃取具体怎样操作？ 141
7．超声萃取后怎样进行土壤颗粒物和萃取液的分离？ 142
8．索氏提取是否可以用其他提取方式替代？ 142
9．水蒸气蒸馏和共水蒸馏有什么区别？ 142
10．水蒸气蒸馏有哪些适用范围？ 143