医学生物学与医学细胞生物学实验(高等院校实验教学示范中心实验教材)

实验室规则及要求 本实验室是医学生物学及细胞生物学等课程实验教学、科研的重要场所，为保证实验室各项工作的正常进行，特制订本规定。 1.按时到达实验室，不得无故迟到、早退或缺课，若有病事假需向任课教师书面申请。 2.进入实验室必须穿上白色工作服，按指定位置入座。 3.实验课上课前，认真填写学生实验登记册，仔细检查显微镜等实验设备，发现异常及时向指导老师报告。 4.老师讲解实验时，应保持安静，认真听讲，不得擅自操作。 5.实验过程中，爱护仪器设备及玻片标本，按计划使用实验材料，严格遵守操作规程。若玻片标本有人为损坏应及时向老师报告，按规定接受处理。 6.实验完成后，各小组组长应及时收齐部分实验器械和玻片标本送还相应存放处；按顺序整理实验报告，交给班长后再统一交给指导老师。 7.实验课下课后，各组应认真清理各自实验台面，清洗器械，打扫实验室卫生，关闭水电及门窗，经指导老师允许后，方可离开实验室。 （刘云） 实验报告书写规则 一、实验报告应在学校统一设计的实验报告纸上完成。 二、每份实验报告应按要求填写专业名称、年级班、姓名、学号、实验科目、实验时间、实验内容以及实验结果与分析（后二者作为主要内容书写）。关于实验目的、原理、材料、方法和步骤等内容需在实验前认真预习，一般不要求书写。 三、每份实验报告在书写前应进行整体构思，根据实验内容和实验结果的具体情况进行版面设计，合理分配实验报告纸的页面，做到布局协调合理，整体美观大方。 四、生物绘图要求 1.绘图应用铅笔（HB、2H或3H）完成。 2.绘图前认真观察显微标本，在实验报告纸上构思设计，按实际观察标本写实绘图，切忌抄书或凭空想象。 3.实验报告纸一般放在仪器设备右边，边观察标本边绘制实验报告图。 4.绘图要求具有科学性，形态结构准确，比例正确，具有真实感、立体感和美感。不能用手机拍照后，参考手机图像绘图，这样会导致比例错误及结构错误。 5.绘图应先轻轻绘出轮廓，作为草图要构思好比例与位置，大小适宜。绘图位置中央偏左，右边留作图注。 6.绘图力求整洁，线条光滑、均匀，点、线协调匀称。一般来说，线条表示观察对象的形状范围，点的疏密则表示观察对象的明暗或浓淡。 7.图注引线平直，不能用箭头指示。图注线应右端对齐，标注文字尽量排列整齐。 8.绘图下方应写明绘图名称、染色方法、放大比例等内容。 9.字体书写规范，大小均匀，美观大方。 （蔡晓明） **部分　实验项目 **篇　基础性实验 实验一　光学显微镜的构造及使用 【目的与要求】 1.掌握普通光学显微镜的正确使用方法。 2.熟悉光学显微镜各部分的结构和功能。 3.了解光学显微镜的维护方法。 【实验原理】 在医学教学、科研及临床工作中使用的普通光学显微镜，是生物医学领域必不可少的研究工具。光学显微镜有直立式和倾斜式两类，均由机械部分、照明部分及光学部分组成（图1-1）。 图1-1　光学显微镜的结构示意图 1.机械部分 （1）镜座（base）：位于*底部，是显微镜的基座，用以支持和稳定镜体。 （2）镜柱（pillar）：是与镜座和镜臂相连的垂直短柱状结构。 （3）镜臂（arm）：现在实验室的显微镜多为镜筒倾斜式显微镜，其镜臂位于镜柱上方，二者连为一体。镜臂略呈弓形，是便于握提显微镜的部位。 （4）调焦器（regulator）：也称调焦螺旋，是显微镜调节焦距的装置，位于镜柱上。调焦器有大小两种螺旋，呈同心圆排列。大的螺旋为粗调焦器，可使镜台快速地大幅度升降，可快速调节焦距，适用于低倍镜观察时调焦；小的螺旋为细调焦器，可使镜台缓慢地较小幅度升降，适用于低倍镜下用粗调焦器找到观察目标后，在高倍镜或油镜下精细地调节焦距，以便对标本进行不同层次、更细致地观察。 （5）镜筒（light tube）：是位于镜臂上方的圆筒状结构，上端装载目镜，下端与物镜转换器相连接。根据镜筒的数目，光学显微镜可分单筒式和双筒式两种类型。 （6）物镜转换器（revolving nosepiece）：又叫旋转盘，位于镜筒的下方，呈凹形圆盘状，其上有3～4个物镜孔，可安装不同放大倍数的物镜。通过顺时针或逆时针旋转而换用不同物镜。使用时注意一定要将旋转盘边缘的缺刻和基座上的“T”形卡相扣合，发出“咔”声，物镜才与光轴合轴，这时方可观察标本。 （7）镜台（stage）：也称载物台，是位于镜臂前方的方形平台，用以承放玻片标本。镜台中央有一圆形通光孔，光线由此照亮标本。镜台上装有推片器，可固定标本，其下方一侧有一螺旋，可使标本前后左右移动。推片器上有纵横游标尺，除用于计算标本移动的距离外，还可利用游标尺上的刻度作为标记，来标定标本在玻片中的位置。 2.照明部分 显微镜的照明装置由光源、反光镜、集光器和光圈等部分组成。 （1）光源：显微镜有不带电光源和带电光源两类。前者利用自然光源或人工光源照明；后者用电光源照明，电光源灯一般装在镜座内或镜座后的灯壳中，可以使用镜座侧面的电压调节器调节光源强度。 （2）反光镜（reflecting mirror）：装在镜座上，位于镜柱的前方，可任意方向转动，把光线反射入聚光器。反光镜的一面是平面镜，另一面是凹面镜。平面镜只有反光作用，一般用于较强光线和固定光源。凹面镜既有反光作用，也有聚光作用，适用于较弱光和散射光。有时在使用平面镜时，视野内会出现窗外景物或窗框等情况，这时可下降聚光器或使用凹面镜消除窗外景物或窗框。电光源显微镜没有反光镜。 （3）集光器（condenser）：又名聚光器，位于通光孔下方，由一组透镜组成，可汇聚反光镜反射来的光线照射到标本上。在镜柱一侧有集光器升降螺旋，可使集光器上下移动，从而调节视野里光的强弱。 （4）光圈（diaphragm）：又叫虹彩光圈或光阑，位于集光器下方，由一组金属薄片组成，其侧面有一光阑小柄，可使光圈扩大或缩小，控制通过的光量。 3.光学部分 （1）目镜（ocular）：为短筒状，插入镜筒的上端。上面刻有5×、10×或15×等符号，表示其放大倍数。有的目镜筒内有一指针，用以指明视野中观察物像的部位，以利示范和提问。一般用10×目镜。 （2）物镜（objective）：装在物镜转换器下方，通常有3～4个，依放大倍数不同分为低倍镜、高倍镜和油镜三种。低倍镜镜体较短，镜孔直径*大，放大倍数小，一般为4×或10×；高倍镜镜体较长，镜孔直径较小，放大倍数为40×、45×或60×；油镜镜体*长，但镜孔直径*小，放大倍数为100×。 通常在物镜上刻有主要性能指标：放大倍数和数值孔径（也叫镜口率）以及镜筒长度和盖玻片厚度。如在10倍的物镜上刻有10/0.25和160（mm）/0.17（mm）。10表示物镜放大倍数；0.25表示镜口率；160表示镜筒长度，0.17表示盖玻片厚度。 数值孔径（numerical aperture，NA），是物镜的主要技术参数，是判断其性能的重要标志。NA的大小可以反映物镜分辨率的大小，数字越大，表示分辨率越高。一般10×物镜的NA为0.25；40×物镜的NA为0.65；100×物镜的NA为1.25。 分辨率与数值孔径的关系： R=0.61λ／NANA=nsin（α/2） 式中，R为分辨率；λ为光波波长；NA为数值孔径；n为介质折射率，空气中n=1；α为透镜的孔径角（标本在光轴的一点对物镜镜口的张角）。 显微镜的总放大倍数等于目镜放大倍数和物镜放大倍数的乘积。如目镜10×、物镜100×，则放大倍数为10×100=1000倍。 【实验材料及用品】 普通光学显微镜及练习片。 【实验步骤】 1.熟悉显微镜的操作步骤 在使用显微镜时，应右手握镜臂，左手托镜座，将其轻放在自己座位前方的实验台上，略偏左侧，距离实验台边缘5～6cm距离为宜。 （1）低倍镜的使用 1）对光：先转动粗调焦器，使镜台下降，使其与物镜之间的距离拉开。旋转物镜转换器，使低倍镜对准通光孔（可听到轻微的“咔”声，表示镜头到位）。然后打开光圈，上升集光器，双眼睁开，左眼对准目镜观察，反复转动反光镜，直到视野内光线明亮均匀为止。若使用电光源显微镜，应首先打开电光源开关，调至合适亮度，再依次调节光圈、反光镜等。 2）放置标本片：将玻片标本放到镜台上，认清标本的正反面，一般有标签或盖玻片的一面为正面。将正面朝上，用推片器固定。然后调节玻片，将要观察的标本对准通光孔的中央。 3）调节焦距：先从显微镜侧面注视低倍镜，慢慢转动粗调焦器，使镜台上升至低倍镜镜头距玻片标本约0.5cm处。然后目镜观察，向相反的方向缓慢转动粗调焦器，使镜台慢慢下降，直到视野中出现模糊物像，再用细调焦器进一步调节至物像清晰。 如果在调节焦距时，物镜与标本之间的距离已超过工作距离（指显微镜物像调节清晰时，物镜*下面透镜的表面与盖玻片上表面的距离）仍未见到物像，则应该严格按上述步骤重新操作。如果物像不在视野中央，可前后左右移动标本，注意玻片移动的方向与物像移动的方向相反。如果光线太强或太弱，可慢慢地缩小或扩大光圈；也可下降或上升集光器，找到*合适的光亮度。注意*强的光线不一定是*合适的光亮度。 若使用的是双目显微镜，首先要根据自己双眼间距来调节两个目镜筒间距，直到双眼同时看到完整的视场。然后闭上左眼，通过细调焦器微调右侧目镜焦距，至右眼观察到清晰图像。再闭上右眼，不需旋转细调焦器，仅旋转左侧目镜筒刻度圈，直到左眼观察到清晰图像。通过这样的调节，就可以用双眼同时观察镜下标本。 （2）高倍镜的使用 1）先在低倍镜下找到物像，然后将要放大观察的部分移至视野正中央，并调节焦距，使物像清晰。 2）从侧面注视物镜，旋转物镜转换器，移走低倍镜转换高倍镜。 3）从目镜中观察，可见视野中有不太清晰的物像，此时慢慢地转动细调焦器，即可见到清晰的物像。注意使用高倍镜时，不要随意转动粗调焦器，以免镜台上升幅度太大而损坏标本或镜头。 如果按上述操作看不到物像，应该检查可能的原因：①目的物不在视野中，可能是低倍镜下没有将目的物移至视野正中；②低倍镜的焦距没有调好；③玻片标本放反了；④物镜松动或有污物。 （3）油镜的使用 1）在高倍镜下，将观察的标本移至视野正中央，同时调节焦距至清晰。 2）适度开大光圈，并上升集光器到*高位置。 3）旋转物镜转换器，移走高倍镜，眼睛注视镜台侧面，在玻片标本上滴一滴香柏油，轻轻转换油镜，使油镜头与香柏油接触或浸没在油滴中。 4）目镜观察，同时上下慢慢转动细调焦器，即可看清物像。 油镜用完后，应立即降低镜台，旋转物镜转换器使油镜移开，先用擦镜纸把油镜头上的油擦一次，再用擦镜纸蘸少许擦镜油擦去油镜头上剩余的油渍，*后再用干净擦镜纸擦干净。但无盖片的标本不能擦，以免损坏标本，可用拉纸法去油：将擦镜纸覆盖在标本油滴上，再滴加擦镜油，平拉擦镜纸即可。 2.练习片的观察与操作练习 取各种组织切片，按照上述显微镜的正确使用方法，反复练习低倍镜和高倍镜的使用，为后续实验打下基础。 【注意事项】 1.取放显微镜时，一定要一手握镜臂，另一手托镜座，切勿单手斜提，以免碰坏显微镜或造成零部件脱落。 2.显微镜不可放置在实验台边缘，以防碰翻落地。 3.使用前要先检查显微镜，如发现缺损或使用时