生物化学实验

前言 **篇实验要求 **章生物化学实验基本要求1 **节生物化学实验室学生实验守则1 第二节生物化学实验室安全管理2 第三节生物化学实验报告格式要求11 第二章生物化学实验操作规范15 **节生物化学实验常用器皿使用规范15 第二节生物化学实验常用仪器使用规范17 第二篇生物化学实验技术 第三章生物大分子制备技术22 **节蛋白质的制备23 第二节酶的制备26 第三节核酸的制备29 第四节多糖的制备33 第四章层析技术38 **节层析技术的原理38 第二节层析的操作形式50 第三节高效液相色谱技术57 第五章离心技术63 **节离心技术简介63 第二节离心机的主要构造及使用65 第六章分光光度技术70 **节分光光度技术的原理70 第二节分光光度计的构造及使用73 第七章电泳技术76 **节电泳技术的原理76 第二节电泳技术的类型78 第三节电泳常用的染色方法88 第八章蛋白质印迹技术91 第三篇实验项目 第九章基础实验项目97 实验一蛋白质及氨基酸的呈色反应97 实验二酪蛋白的制备100 实验三蛋白质的沉淀作用和等电点测定102 实验四蛋白质透析法脱盐105 实验五氨基酸的纸层析分离106 实验六分子筛层析法脱盐108 实验七分子筛层析法分离纯化蛋白质及分子质量的测定110 实验八Folin-酚试剂法测定蛋白质浓度114 实验九紫外吸收法测定蛋白质浓度116 实验十考马斯亮蓝染色法测定蛋白质浓度117 实验十一醋酸纤维素膜电泳分离血清蛋白119 实验十二聚丙烯酰胺凝胶电泳分离卵清蛋白122 实验十三不连续SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质的分子质量125 实验十四唾液淀粉酶的动力学性质127 实验十五胰蛋白酶的制备及酶活力测定130 实验十六温度、pH对糖化酶活力的影响133 实验十七果蔬中维生素C的定量测定（2，6-二氯酚靛酚滴定法）136 实验十八荧光光度法定量测定核黄素（维生素B2）139 实验十九DEAE-纤维素薄层层析分离鉴定核苷酸141 实验二十植物基因组DNA的提取143 实验二十一PCR扩增小麦持家基因Rubisco145 实验二十二琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段147 实验二十三还原糖的提取及含量测定148 实验二十四糖酵解中间产物的测定150 实验二十五脂肪酸氧化——酮体的生成152 实验二十六细胞活力和细胞凋亡检测154 第十章综合性实验项目156 综合性实验一凯氏定氮法测定牛奶的蛋白质含量156 综合性实验二大蒜超氧化物歧化酶的提取、纯化及性质测定166 综合性实验三鸡卵类黏蛋白的分离纯化、活性及分子质量测定173 综合性实验四动物组织转氨酶的提取及活力测定182 综合性实验五酵母蔗糖酶的提取、纯化及酶学性质研究187 综合性实验六植物过氧化物酶的提取及同工酶鉴定195 综合性实验七蛋白质印迹检测重组大肠杆菌丝氨酸羟甲基转移酶198 综合性实验八酵母RNA的提取、鉴定及定量测定202 综合性实验九兔肝组织总RNA的提取及RT-PCR208 综合性实验十兔肝组织DNA的提取及定量测定213 综合性实验十一质粒载体构建与蓝白斑筛选217 综合性实验十二大豆多糖的提取、单糖组成及抗氧化活性测定220 综合性实验十三辅酶Q10的超临界流体萃取与HPLC分离225 参考文献231 附录一常用标准溶液的配制和标定232 附录二常用缓冲液的配制方法236 附录三硫酸铵饱和度的调整用表241 附录四柱层析材料243