实用神经变性疾病生物学实验方法与技术

**章　原代神经细胞培养和细胞功能测定　/ 1**节　原代皮质和海马神经元培养 1第二节　新生小鼠中脑多巴胺能神经元培养 3一、单层皮质星形胶质细胞表面培养新生鼠中脑多巴胺能神经元 3二、单层星形胶质细胞表面培养新生鼠中脑多巴胺能神经元及形成　　神经突触 9三、本节实验中使用到的试剂和溶液 11四、注意事项 13五、常见问题及解决方案 13六、预期结果 13七、时间因素 14第三节　小鼠神经干细胞培养 14一、成年鼠神经干细胞培养 14二、新生鼠海马神经干细胞的培养 19三、胎鼠神经干细胞的培养 20第四节　原代神经胶质细胞培养 21一、星形胶质细胞的分离和培养 21二、新生鼠小胶质细胞的原代培养 23三、成年鼠小胶质细胞的分离和培养 25第五节　小胶质细胞功能实验 29一、趋化和迁移实验 29二、体外测定小胶质细胞吞噬功能（吞噬尼罗红微球/a突触核蛋白/ab） 30第二章　模式动物行为学实验　/ 34**节　morris水迷宫 34第二节　y-迷宫 36第三节　小鼠平衡功能实验 39第四节　抑郁模型的建立和评定 40一、抑郁症的模型制作 41二、抑郁动物的行为学评价 45第五节　嗅觉行为功能测定 47一、埋藏食物小球实验 48二、嗅觉迷宫 48第六节　大脑中动脉闭塞模型的建立和评定 49第七节　运动功能评定 52一、小鼠肢体力量测试实验——小鼠抓力测试 52二、小鼠耐力测试实验——跑台实验 53第八节　感觉（痛触觉）系统评估 54一、von frey test 54二、智能热板仪 56三、甩尾实验 57第三章　神经病理学实验　/ 59**节　脑组织的取材、保存和标本制作 59第二节　脊髓组织的取材、保存和标本制作 62一、脊髓的取材和保存 62二、 脊髓冰冻切片的制作 64第三节　小鼠脑脊液采集 66第四节　海马脑片场电位的神经电生理记录方法 67第五节　神经免疫组织化学和免疫荧光染色 71第六节　透视电镜标本制作 74第七节　老化组织相关病理特殊染色（sa-b-gal 、银染色） 77一、神经原纤维缠结（nfts）染色 77二、b-淀粉样蛋白染色 80三、衰老相关b-半乳糖苷酶染色 82第八节　 神经组织高尔基染色 83第九节　神经组织体视学分析技术 86第十节　共聚焦扫描及定量技术 92一、激光共聚焦显微镜的成像原理 92二、激光共聚焦显微镜在神经变性疾病研究中的运用 93三、激光共聚焦显微镜结构 95四、基本扫描及图像获取 95五、微分干涉差（dic）扫描及图像获取 102六、拼图扫描及图像获取 103七、z-stack扫描及图像获取 103八、时间序列扫描 105九、激光共聚焦图像定量及后处理 106第四章　神经生化和基因检测　/ 115**节　转基因动物的基因型鉴定、保种和管理 115一、小鼠生殖生理 115二、小鼠的生长周期 116三、基因工程鼠饲养繁殖一般流程和注意事项 116四、常用小鼠品系的概况 117五、几种常用神经变性疾病转基因鼠的介绍和鉴定 118第二节　神经组织蛋白检测 125一、蛋白质印迹法 125二、免疫共沉淀原理及步骤 130三、动物脑组织匀浆检测ab 132第三节　rna提取及实时荧光定量pcr技术 134一、rna提取 134二、rt-pcr 135三、qpcr 135第四节　基因芯片检测 140一、单核苷酸多态性芯片实验 140二、基因表达谱芯片检测 142第五节　荧光素酶报告基因技术分析启动子转录活性 143第六节　荧光定量pcr法检测端粒酶活性 146第七节　中枢神经系统突触和非突触线粒体的分离提取 148第五章　分子影像技术检测神经变性疾病　/ 157**节　pet/spect-ct显像探针的制备 158第二节　fmri成像技术的原理及其实验设计与数据处理 164一、fmri实验设计 164二、实验设备 166三、实验数据处理 166四、fmri实验相关的准备 169五、小结 170第六章　神经变性疾病患者临床神经评估、样本保存和数据库建设　/ 171**节　神经变性疾病临床登记和数据库建立和实施 171一、临床研究目标的确立 171二、研究方案的确立 172三、组织机构的建立 173四、病例报告表（crf）的建立 174第二节　神经变性疾病患者血液、脑脊液组织样本的保存和处理 177一、血液及血液成分的处理和保存 178二、脑脊液的处理和保存 179三、标本dna的提取和保存 180　附表6-1　标本保存详细记录 180　附表6-2　关于使用组织样本开展科学研究的知情同意书 181第三节　 神经心理认知障碍测试诊断系统 182一、医生端系统 182二、用户管理 183三、临床病例登记 183四、案例管理 186五、统计打印 190六、量表管理 191第七章　神经生物学常用分析及作图软件的应用　/ 193**节　image j神经生物分析软件的应用 193一、 image j神经生物分析软件的基本功能 193二、 image j神经生物分析软件分析免疫荧光定量技术 197第二节　graphpad prism 6.0作图和统计应用 205一、折线图 205二、直条图 208三、生存曲线图 216四、散点图 219五、饼图 225第三节　logistic回归、cox风险模型以及kaplan-meier曲线的统计应用 231一、logistic回归分析和roc工作曲线的制订 231二、 cox回归分析 238三、kaplan-meier曲线分析 242第四节　endnote×7的应用 245一、文献管理 245二、论文撰写 245