内生菌研究方法

**章内生菌的概述/1

**节内生菌的定义与种类1

一、内生菌的定义1

二、内生菌的种类2

第二节内生菌的活性与应用4

一、内生菌的活性5

二、内生菌的应用8

参考文献9



第二章内生菌研究方法的前期准备/14

**节显微镜基础知识及使用14

一、普通光学显微镜14

二、相差显微镜16

三、荧光显微镜16

四、扫描电子显微镜20

五、透射电子显微镜21

六、原子力显微镜22

第二节常规器具和设备23

一、常用器皿23

二、接种工具24

三、常规仪器设备24

第三节常规器具的洗涤25

一、洗涤剂26

二、器皿的洗涤26

三、载玻片和盖玻片的洗涤26

第四节器皿的包扎和棉塞的制作27

一、移液管的包扎27

二、培养皿的包扎27

三、锥形瓶的包扎27

四、棉塞的制作28

第五节常规灭菌方法28

一、加热灭菌法28

二、过滤除菌法30

三、辐射灭菌法30

四、化学灭菌法31

第六节常规接种方法31

一、划线接种法31

二、穿刺接种法32

三、点接种法32

第七节培养基及其配制32

一、培养基的成分32

二、培养基的种类33

三、培养基及其配制34

参考文献36



第三章内生菌的分离/38

**节样品的收集与处理38

第二节样品的表面消毒39

第三节内生菌分离培养基的选择41

一、内生真菌分离培养基的选择41

二、内生细菌分离培养基的选择42

三、内生放线菌分离培养基的选择43

第四节内生菌的分离方法44

一、植物样品的分离方法44

二、海洋生物样品的分离方法45

三、昆虫等其他生物样品的分离方法46

第五节内生菌的分离实例46

实例一三叉苦内生真菌的分离46

实例二砂仁内生细菌的分离47

实例三变叶木、阴香内生放线菌的分离47

实例四珊瑚内生菌的分离48

实例五白蚁成虫内生菌的分离48

参考文献48



第四章内生菌的鉴定/51

**节内生细菌的鉴定51

一、细菌的特征及分类依据51

二、细菌鉴定的一般程序51

三、内生细菌鉴定方法52

四、细菌常用分类系统简介及检索80

第二节内生放线菌的鉴定87

一、放线菌的分类研究87

二、内生放线菌鉴定方法91

三、内生链霉菌种群特征99

四、放线菌分类系统99

第三节内生真菌的鉴定103

一、真菌的特征及分类依据103

二、内生真菌的鉴定104

参考文献113



第五章内生菌的培养与发酵/116

**节内生菌的培养116

一、固体培养法116

二、液体培养法118

第二节连续培养技术119

第三节同步培养技术120

一、选择法120

二、诱导法121

第四节高密度培养技术122

一、固定化培养122

二、补料分批培养123

三、膜过滤培养技术123

第五节固体发酵技术124

第六节内生菌的发酵实例125

实例一三桠苦内生真菌SCK-Y9同步生长技术125

实例二变叶木内生细菌BYG2-5膜过滤培养125

实例三链霉菌HN6固体发酵技术125

参考文献127



第六章内生菌的定殖研究/128

**节内生菌的侵染与定殖128

一、植物内生菌的侵染方式128

二、植物内生菌的定殖129

第二节内生菌的定殖检测129

一、抗生素标记法130

二、免疫学方法131

三、基因标记法143

四、特异性寡核苷酸片段标记法146

五、基因芯片法146

六、荧光定量PCR检测法147

第三节内生菌的定殖研究实例147

参考文献149



第七章内生菌的活性评价方法/151

**节内生菌杀虫活性评价方法151

一、触杀作用评价方法151

二、胃毒作用评价方法152

三、螨类的评价方法154

四、酶活评价方法155

第二节内生菌抑菌活性评价方法166

一、内生菌离体活性评价方法166

二、内生菌组织活性评价方法171

三、内生菌盆栽活性评价方法174

第三节内生菌抗氧化活性评价方法176

一、TLC法检测自由基清除活性176

二、高价铁离子还原作用176

三、DPPH自由基清除作用176

四、ABTS自由基清除作用177

五、超氧阴离子清除作用177

六、羟基自由基清除作用177

七、过氧化氢清除作用178

八、实例蜂巢珊瑚内生真菌的抗氧化活性研究178

第四节内生菌诱导靶标菌细胞凋亡评价方法181

一、对细胞内氧化应激的评价181

二、对线粒体膜电位的评价182

三、对靶标菌菌体内抗氧化酶系的评价182

四、对细胞内还原型谷胱甘肽含量的评价185

五、对小靶标菌细胞凋亡的诱导186

参考文献187



第八章内生菌的促生作用/190

**节直接促生作用190

一、生长素190

二、固氮作用192

三、解磷作用192

四、解钾作用193

五、分泌铁载体193

第二节间接促生作用194

一、拮抗作用194

二、诱导系统抗性194

第三节促生作用检测198

一、形态指标检测198

二、生理指标检测199

第四节互作效应202

第五节内生菌促生作用研究实例203

实例一链霉菌HN6对香蕉的促生作用研究203

实例二放线菌HN20对黄瓜、生菜的促生作用研究205

实例三放线菌WZS1-1与WZS2-1菌株的促生作用测定208

参考文献211



第九章内生菌代谢产物的研究/213

**节内生菌代谢产物的分离213

一、小分子代谢产物的提取分离213

二、蛋白质的提取分离220

三、多糖的提取分离223

第二节内生菌代谢产物的鉴定225

一、定性鉴定225

二、红外光谱分析法227

三、核磁共振波谱法228

四、质谱分析法231

五、圆二色光谱分析法232

第三节真菌Xylaria feejeenisis的代谢产物研究232

参考文献236



第十章内生菌的应用研究/237

**节内生菌可湿性粉剂的研制237

一、HN6可湿性粉剂的制备方法237

二、可湿性粉剂的制备方法优化239

三、HN6可湿性粉剂对香蕉枯萎病的盆栽防治效果240

四、HN6可湿性粉剂对香蕉枯萎病的田间防治效果241

第二节内生菌可溶性液剂的研制242

第三节内生菌微生物肥料的研制243

一、内生菌液体肥料的研制244

实例一枯草芽孢杆菌HBS-1和白刺链霉菌NLG-3的液体肥料244

实例二HN20的液体肥料244

实例三黄色链霉菌BYM-2的液体肥料244

实例四蜜糖草固氮螺菌SRJ2-4的液体肥料245

二、内生菌固体肥料的研制245

实例一含荧光假单胞杆菌YXG2-3的复合固体肥料245

实例二含芽孢杆菌HBS-1的复合固体肥料246

实例三含岸滨芽孢杆菌BYG2-5的复合固体肥料246

第四节内生菌保鲜剂的研制247

一、香蕉防腐保鲜剂的应用247

二、芒果防腐保鲜剂的应用248

第五节内生菌菌剂的检测249

参考文献252



第十一章内生菌菌种的保藏/253

**节菌种保藏的基本原理253

第二节菌种保藏的基本方法253

一、斜面传代保藏法253

二、矿物油保藏法254

三、麸皮保藏法254

四、沙土管保藏法255

五、土壤培养保藏法256

六、蒸馏水保藏法256

七、甘油悬液保藏法256

八、冷冻干燥保藏法257

九、液氮超低温保藏法257

十、素瓷珠保藏法258

十一、琼脂穿刺保藏法258

十二、固定化保藏法258

十三、宿主保藏法259

第三节菌种保藏的注意事项259

参考文献260



附录262

附录一培养基及配方262

附录二常用酸碱指示剂的配制270

附录三常用消毒剂的配制271