生物化学实验(第六版)

目录
第六版前言
第五版前言
**章 糖类 1
实验1 糖的颜色反应 1
实验1.1 莫氏实验 1
实验1.2 塞氏实验 2
实验1.3 杜氏实验 4
实验2 糖的还原作用 5
实验3 糖的旋光性和变旋现象 6
实验4 血糖的定量测定（Folin-Wu法） 9
实验5 血糖的定量测定（葡萄糖氧化酶法） 11
实验6 血液中葡萄糖的测定（邻甲苯胺法） 13
实验7 植物组织中可溶性总糖的测定（蒽酮比色法） 15
实验8 总糖和还原糖的测定（3， 5-二硝基水杨酸法） 18
实验9 淀粉的制备与水解 20
实验10 淀粉的分离纯化及其组分含量的测定 22
实验11 果胶的提取与果胶含量的测定 25
第二章 脂质 29
实验12 脂肪的组成 29
实验13 卵磷脂的提取和鉴定 31
实验14 粗脂肪含量的测定（Soxhlet抽提法） 32
实验15 碘价的测定（Hanus法） 35
实验16 皂化价的测定 37
实验17 脂肪酸价的测定 39
实验18 脂肪乙酰价的测定 40
实验19 血清胆固醇的定量测定（磷硫铁法） 42
实验20 血清总胆固醇的测定（邻苯二甲醛法） 43
实验21 血清胆固醇的定量测定（乙酸酐法） 45
实验22 血清甘油三酯简易测定法 47
实验23 血清甘油三酯的测定（GPO-PAP法） 49
实验24 丙二醛（MDA）的测定 51
第三章 蛋白质 55
实验25 蛋白质的颜色反应 55
实验26 蛋白质的沉淀反应 58
实验27 蛋白质浓度测定（微量凯氏定氮法） 60
实验28 蛋白质浓度测定（双缩脲法） 63
实验29 蛋白质浓度测定（Folin-酚试剂法） 65
实验30 蛋白质浓度测定（紫外光吸收法） 66
实验31 蛋白质浓度测定（考马斯亮蓝结合法） 68
实验32 非蛋白氮（NPN）的测定 70
实验33 甲醛滴定法 72
实验34 DNP-氨基酸的制备和鉴定 73
实验35 DNS-氨基酸的制备和鉴定 76
实验36 用DNS法鉴定蛋白质或多肽的N-端氨基酸 79
实验37 用DNS法测定多肽的氨基酸组成 82
实验38 肽的序列分析（PTH法） 84
实验39 尿素对蛋白质的变性作用 86
实验40 氨基酸纸层析法 88
实验41 氨基酸微晶纤维素薄板层析法 91
实验42 离子交换柱层析法分离氨基酸 93
实验43 血清白蛋白的分离与纯化 95
实验44 凝胶层析法分离纯化蛋白质 97
实验45 DEAE-Sephadex A-25分离纯化多肽 100
实验46 亲和层析法分离纯化单克隆抗体 102
实验47 醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白质 103
实验48 血清糖蛋白醋酸纤维薄膜电泳 106
实验49 牛乳中酪蛋白和乳糖的制备与鉴定 109
实验50 聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳法分离血清蛋白质 111
实验51 聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳法鉴定胰岛素 114
实验52 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的相对分子质量 117
实验53 用等电聚焦电泳法测定蛋白质等电点 120
实验54 对流免疫电泳法测定胎儿甲种蛋白质 122
实验55 火箭免疫电泳法 124
实验56 Western 印迹 126
实验57 酶联免疫吸附测定（ELISA） 128
第四章 核酸 131
实验58 核酸的定量测定（定磷法） 131
实验59 酵母RNA的提取 133
实验60 RNA的定量测定（苔黑酚法） 135
实验61 动物肝脏中DNA的提取 136
实验62 DNA的定量测定（二苯胺法） 138
实验63 5′-核苷酸的定量测定（过碘酸氧化法） 139
实验64 DEAE-纤维素薄板层析法测定核苷酸 142
实验65 核酸的酶法降解以及葡聚糖凝胶层析法制备5′-单核苷酸 144
实验66 质粒DNA的提取 145
实验67 DNA琼脂糖凝胶电泳 147
第五章 酶 151
实验68 影响酶促反应的因素——温度、pH、激活剂及抑制剂 151
实验69 胰蛋白酶米氏常数的测定 154
实验70 胆碱酯酶米氏常数的测定 157
实验71 过氧化氢酶米氏常数的测定 159
实验72 用正交法测定几种因素对酶活力的影响 161
实验73 胰蛋白酶抑制剂苯甲基磺酰氯对胰蛋白酶的抑制作用 164
实验74 溶菌酶的提纯结晶和活力测定 166
实验75 猪胰糜蛋白酶的制备和纯度鉴定 168
实验76 大肠杆菌碱性磷酸酶的制备 170
实验77 碱性磷酸酶的提取和分离及比活力测定 173
实验78 大蒜细胞SOD的提取和分离及活力测定 177
实验79 琼脂糖凝胶电泳法分离乳酸脱氢酶同工酶 180
实验80 聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离乳酸脱氢酶同工酶 182
实验81 肝脏谷丙转氨酶活力测定 184
实验82 血清谷丙转氨酶活力测定 187
第六章 维生素 190
实验83 维生素A的定性测定 190
实验84 维生素B1的定性测定 191
实验85 维生素C的定量测定（2， 6-二氯酚靛酚滴定法） 192
实验86 维生素C的定量测定（磷钼酸法） 195
实验87 核黄素（维生素B2）荧光光度定量测定法 197
实验88 胡萝卜素的定量测定 199
实验89 荧光法测定核黄素结合蛋白-核黄素的解离常数 201
第七章 激素 204
实验90 甲状腺素的测定 204
实验91 雌二醇的测定 206
第八章 物质代谢与生物氧化 208
实验92 肌糖原的酵解作用 208
实验93 脂肪酸的β-氧化 210
实验94 发酵过程中无机磷的被利用和ATP的生成（ATP的生物合成） 213
第九章 综合实验 215
实验95 肝素钠的分离提纯及含量测定 215
实验95.1 肝素钠粗制品的制备之（Ⅰ）——盐解法 215
实验95.2 肝素钠粗制品的制备之（Ⅱ）——酶解法 217
实验95.3 肝素钠粗制品的纯化 220
实验95.4 肝素钠的生物测定法 222
实验95.5 肝素钠的定量测定 225
实验96 用高效液相层析（HPLC）定量测定胰岛素中的氨基酸 227
实验96.1 胰岛素的酸水解 227
实验96.2 用HPLC 定量测定胰岛素水解产物中的氨基酸 228
实验97 维生素C 对过氧化氢（H2O2）诱导的小鼠巨噬细胞氧化损伤的保护作用 231
实验97.1 小鼠腹腔巨噬细胞的收集与培养 231
实验97.2 MTT法测定巨噬细胞死亡率 232
实验97.3 活性氧检测试剂盒探测细胞内活性氧的水平 234
实验97.4 NO和NO合成酶活性的测定 235
实验98 酵母醇脱氢酶的提纯及其性质的研究 237
实验98.1 酵母醇脱氢酶的提纯 237
实验98.2 酵母醇脱氢酶的凝胶层析 240
实验98.3 酵母醇脱氢酶的专一性 241
实验98.4 酵母醇脱氢酶的动力学研究 243
实验99 α-淀粉酶的分离纯化、鉴定和Km、Vmax的测定 249
实验99.1 α-淀粉酶的活力测定 249
实验99.2 α-淀粉酶的疏水层析 252
实验99.3 α-淀粉酶的离子交换柱层析 254
实验99.4 聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳法鉴定α-淀粉酶 255
实验99.5 米氏常数（Km）和*大反应速率（Vmax）的测定 257
实验100 螺旋藻藻蓝蛋白的分离、纯化与鉴定 260
实验100.1 螺旋藻粗藻蓝蛋白的制备 260
实验100.2 离子交换柱层析法分离藻蓝蛋白 261
实验101 原花色素的提取、纯化与测定 262
实验101.1 山楂原花色素的提取 263
实验101.2 原花色素的测定（Ⅰ） 264
实验101.3 原花色素的测定（Ⅱ） 266
实验102 熊果酸的制备和测定 267
实验102.1 山楂熊果酸的制备 268
实验102.2 熊果酸含量测定 268
实验103 镍化合物诱导人Jurkat 细胞凋亡途径的研究 270
实验103.1 Jurkat 细胞的培养 270
实验103.2 Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡 272
实验103.3 RT-PCR检测凋亡相关基因bcl-2的表达 274
实验103.4 酶联免疫吸附检测Bcl-2蛋白表达水平 276
实验104 cDNA的制备与鉴定 278
实验104.1 从HepG2细胞中提取总RNA 278
实验104.2 逆转录获得人HepG2细胞的cDNA 280
实验104.3 cDNA中肝癌相关基因AFP的鉴定 282
第十章 临床生化指标的自动测定 286
附录 287
一、生物化学实验须知 287
二、玻璃仪器的洗涤及一些常用的洗涤剂 288
三、移液器的使用 289
四、吸管的使用 290
五、过滤和离心 291
六、930型荧光光度计的使用 292
七、UV2600紫外可见分光光度计的使用 293
八、Nano-200超微量核酸分析仪 296
九、自动生化分析仪 298
十、全自动免疫分析仪TOSOH AIA 2000标准化操作规程 298
十一、血红蛋白检测仪Bio-Rad D-10标准化操作规程 298
十二、实验室常用酸碱的相对密度和浓度 298
十三、常用酸碱指示剂 298
十四、缓冲液的配制 299
十五、恒沸盐酸的制备 305
十六、大肠杆菌丙酮粉的制备 305
十七、生物化学中某些重要化合物的Mr及pK值 305
十八、氨基酸的一些物理常数 307
十九、某些蛋白质的物理性质 308
二十、化学元素的相对原子质量表 309
二十一、离心机转速（r/min）与相对离心力（RCF）的换算 310
二十二、硫酸铵饱和度的常用表 312
二十三、常用离子交换剂 313
二十四、常用凝胶过滤层析介质 315
主要参考文献 317