烯硫醚动态共价键及其化学生物学应用

第1章 绪论 001
1.1 引言 001
1.2 动态组合化学 001
1.2.1 超分子化学 001
1.2.2 动态共价化学 002
1.2.3 动态共价键 002
1.3 动态共价键的应用 005
1.3.1 动态共价键在生物活性物质及生命机制传感方面的应用 005
1.3.2 动态共价键作为连接键在药物递送及控释方面的应用 010
参考文献 019 第2章 烯硫醚动态共价键氧化还原响应性能研究及调控 024
2.1 烯硫醚动态共价键体系模型的构建 025
2.1.1 主要试剂 025
2.1.2 实验仪器 025
2.1.3 研究思路及合成路线 026
2.1.4 烯硫醚动态共价键模型体系的合成 026
2.2 烯硫醚动态共价键体系氧化还原响应性质研究及能力调控 031
2.2.1 储备溶液配制说明及实验条件 031
2.2.2 C-CN2COOMe的GSH取代动力学 031
2.2.3 iPrS-CN2COOMe的GSH取代动力学 032
2.2.4 Fmoc-bMe-S-Cys-CN2COOMe的GSH取代动力学 034
2.2.5 烯硫醚动态共价键的DTT还原 035
2.3 总结与展望 035
参考文献 037 第3章 烯硫醚动态共价键在蛋白质标记中的应用 038
3.1 基于烯硫醚动态共价键的内源性单双巯基蛋白同步可视化传感 039
3.1.1 引言 039
3.1.2 实验试剂与仪器 040
3.1.3 研究思路及合成路线 041
3.1.4 探针设计与合成 042
3.1.5 实验条件及储备溶液配制说明 044
3.1.6 结果与讨论 045
3.1.7 总结与展望 053
3.2 噬菌体展示荧光环肽探针文库构建及蛋白质分析研究 054
3.2.1 引言 054
3.2.2 荧光环肽文库设计思路及合成路线 055
3.2.3 应答模块合成路线 059
3.2.4 噬菌体展示文库探针合成 059
3.2.5 探针响应及修饰性能考察 063
3.2.6 噬菌体展示多肽文库滴度测定 065
3.2.7 噬菌体展示荧光环肽文库对靶标蛋白Biotin-Keap1的筛选 065
3.2.8 单克隆测序结果 066
3.2.9 多肽的合成与环化 066
3.2.10 环肽分子对靶标蛋白的荧光检测 067
3.2.11 总结与展望 068
3.3 基于新型烯硫醚动态共价键的细胞膜表面巯基-二硫键交换机制研究 068
3.3.1 引言 068
3.3.2 实验试剂与仪器 070
3.3.3 研究思路及合成路线 070
3.3.4 探针合成 072
3.3.5 谷胱甘肽取代动力学 076
3.3.6 结果与讨论 076
3.3.7 总结与展望 084
3.4 基于烯硫醚动态共价键探索细胞膜表面巯基受体介导增强跨膜运输机制 085
3.4.1 引言 085
3.4.2 烯硫醚 087
3.4.3 烯硫醚动态探针体系合成 092
3.4.4 总结与展望 097
参考文献 100 第4章 烯硫醚动态共价键在药物递送领域的应用探究 104
4.1 基于烯硫醚动态共价连接键的非内化药物递送体系构建 104
4.1.1 引言 104
4.1.2 研究思路及合成路线 105
4.1.3 烯硫醚非内化药物递送体系合成 107
4.1.4 聚合物POEGMA分子量及聚合度计算 113
4.1.5 给药体系修饰效率表征 113
4.1.6 S-C及S-S猝灭体系的GSH还原动力学 113
4.1.7 烯硫醚载药系统给药内化机制研究 115
4.1.8 总结与展望 116
4.2 膜表面巯基受体-烯硫醚动态共价键交换反应介导跨膜递送体系构建 116
4.2.1 引言 116
4.2.2 设计思路及研究内容 122
4.2.3 递送体系合成 123
4.2.4 总结与展望 128
参考文献 129 第5章 烯硫醚动态共价键在多肽环化领域的应用探究 132
5.1 引言 132
5.1.1 蛋白质-蛋白质相互作用 132
5.1.2 多肽药物 133
5.1.3 环肽 134
5.1.4 多肽位点特异性反应 136
5.2 研究思路及意义 145
5.3 二元环肽噬菌体文库构建及靶标筛选流程 146
5.3.1 实验材料及试剂 146
5.3.2 实验仪器 146
5.3.3 溶液配制 147
5.3.4 实验方法 148
5.4 基于烯硫醚键的二元环肽配体筛选评价 153
5.4.1 靶标蛋白生物素化磁珠捕获实验 153
5.4.2 噬菌体展示多肽文库滴度测定 154
5.4.3 噬菌体展示多肽文库对生物素化的靶标蛋白Biotin-mCNα筛选 154
5.4.4 单克隆测序结果 155
5.4.5 高通量测序结果 155
5.4.6 多肽的合成与环化 156
5.4.7 活性测试 156
5.5 总结与展望 157
参考文献 157