重量实验示范中心推荐教材动物学实验

第1部分 基础性实验　　实验1 动物的细胞和组织　　【目的与要求】　　1. 了解动物细胞的基本结构；　　2. 掌握动物组织临时装片和涂片的一般制作方法；　　3. 掌握动物4类基本组织的结构特点，理解组织结构与机能的关系。　　【实验材料】　　活蛙，蝗虫浸制标本，动物各组织的玻片标本。　　【用具与药品】　　显微镜、载玻片、盖玻片、解剖器、吸管、吸水纸、牙签、染色缸、玻片架。　　0.1%的亚甲蓝、0.65%及0.9%的生理盐水溶液、甲醇、吉姆萨染液、蒸馏水。　　【操作与观察】　　1. 制片与观察　　（1）人口腔上皮细胞的制备与观察　　滴一滴0.9%生理盐水于载玻片中央，用牙签在自己的口腔颊部轻轻刮几下（注意不要用力过猛，以免损伤颊部），将刮下的白色黏性物质薄而均匀地涂在载玻片上，然后加盖玻片，在低倍镜下观察。口腔上皮细胞常数个连在一起，由于口腔上皮细胞薄而透明，因此光线需要暗些。找到口腔上皮细胞后，将其移至视野中心，再转高倍镜观察。口腔上皮细胞呈扁平多边形。试辨认细胞核、细胞质和细胞膜。若观察不清楚时，可在盖玻片一侧加一滴0.1%的亚甲蓝，另一侧放一小块吸水纸吸引，如此可使染液流入盖玻片下面，将细胞染成浅蓝色，核染色较深。注意染液不可过多，以免妨碍观察。　　（2）骨骼肌的制片与观察　　用尖头镊子取蝗虫浸制标本胸部肌肉少许，置于载玻片上的水滴中。用解剖针仔细分离肌纤维（越细越好）。用0.1%亚甲蓝染色，盖上盖玻片后置于显微镜下观察。　　（3）血液涂片的制备与观察　　左手从蛙背面握蛙，右手持注射器从蛙胸部进针刺入蛙心脏采血，滴一滴在洁净载玻片右端，注意血滴不宜过大。另取边缘光滑的一块载玻片作推片，斜置于**块载玻片血滴的左缘，角度成40°左右。将推片稍向右移，接触血滴，使血液充满两玻片之间的夹角。再将推片向左方匀速推进，使玻片上留下薄而均匀的血膜。摇动涂有血膜的玻片，使之尽快干燥，避免细胞皱缩。晾干后的血涂片放入盛有甲醇的染色缸内，固定3~5min。将固定后的血涂片平放在玻片架上，滴加数滴吉姆萨染液，以覆盖血膜为宜，染色15~30min。然后在染色玻片的一端用自来水细流缓缓冲去染液，斜立血涂片于玻片架上，晾干后置显微镜下观察。　　在低倍镜下选择分布均匀的血细胞，换高倍镜观察。蛙红细胞呈椭圆形，中央有一椭圆形细胞核呈蓝色，细胞质呈红色，此外，还可见到白细胞和凝血细胞。　　2. 观察各组织制片　　（1）上皮组织　　1）单层立方上皮（甲状腺切片）：低倍镜观察，可看到许多大小不等的、圆形或椭圆形的红色甲状腺滤泡。高倍镜观察，滤泡壁由一层立方上皮细胞构成，核圆形、蓝紫色，位于细胞中央，细胞质粉红色（图1-1）。　　图1-1 单层立方上皮（黄诗笺，2006）　　2）单层柱状上皮（小肠横切片）：低倍镜观察，可见黏膜面形成许多指状突起，突向管腔，突起表面覆有一层柱状上皮。高倍镜观察，可见上皮细胞为柱状，核长椭圆形、蓝紫色，靠近细胞的基底部。把光圈缩小，减少光量，可见细胞的游离面有一层较亮的粉红色膜状结构，称为纹状缘。在柱状细胞之间散在有杯状细胞，此细胞上端膨大、下端细小，核呈三角形或半圆形，位于细胞基底部。在杯状细胞上端的细胞质内积有大量不着色的黏液，在切片上呈卵形空泡状结构，细胞游离面无纹状缘（图1-2）。　　图1-2 单层柱状上皮（黄诗笺，2006）　　3）复层扁平上皮（食道横切片）：低倍镜观察，此上皮由许多层细胞组成，上皮的基底面呈波浪形。高倍镜观察，可见与基膜相连的是一层排列整齐的矮柱状细胞，细胞核椭圆形。中层为几层多角形细胞，排列不整齐，核扁平。接近上皮表面的细胞变为扁平状，核着色淡，甚至模糊不清（图1-3）。　　图1-3 复层扁平上皮（黄诗笺，2006）　　（2）肌肉组织　　1）骨骼肌：低倍镜观察，在纵切面上可见骨骼肌为长条形肌纤维，在肌纤维间有染色较淡的结缔组织。高倍镜观察，单个骨骼肌纤维呈长圆柱形，其表面有肌膜，肌膜内侧有许多染成蓝紫色的椭圆形细胞核。缩小光圈，使视野不致过亮，可见到每条肌纤维内有很多纵行的细丝状肌原纤维，肌原纤维上有明暗相间的横纹，即明带和暗带。在横切面上，可见肌纤维呈多边形或不规则圆形，外有肌膜，细胞核卵圆形紧贴肌膜内侧。肌原纤维呈小红点状，在肌浆内排列不均匀，所以在横切面上呈现小区（图1-4）。　　图1-4 骨骼肌纵、横切片（黄诗笺，2006）　　A. 骨骼肌纵切面；B. 骨骼肌横切面　　2）心肌：先低倍镜后高倍镜观察，在纵切面上，心肌纤维彼此以分支相连，核卵圆形，位于肌纤维中央。缩小虹彩光圈，使光线暗些，可看到心肌纤维的横纹，但不及骨骼肌的明显，在心肌纤维及其分支上，可见到染色较深的梯形横线，即闰盘。在横切面上，心肌纤维为不规则横线，由于切片的关系，有的有核，有的无核（图1-5）。　　图1-5 心肌纵切面（黄诗笺，2006）　　3）平滑肌：先低倍镜后高倍镜观察蛙的平滑肌分离装片，可见分离的平滑肌纤维呈长梭形，核长椭圆形，位于细胞中部，在常规染色标本上肌原纤维分辨不清楚（图1-6）。　　图1-6 平滑肌纵切面和横切面（黄诗笺，2006）　　（3）神经组织（脊髓横切片）　　肉眼观察，脊髓横切片中央为蝴蝶状的灰质，其中心有一孔为中央管，灰质较狭的一端为背角，较宽的为腹角；包围在灰质周围染色较淡的部分是白质。　　低倍镜观察，将脊髓灰质腹角移至视野中央，观察神经元。在腹角内有许多较大的多突起细胞即脊髓腹角运动神经元，为多极神经元。神经元胞体上的突起包括树突和轴突，但两者不易区分，一般可根据轴突基部的轴丘处染色较浅（无尼氏体）来识别轴突。选择一个胞体较大、突起较多、核较清晰的神经元移至视野中央。高倍镜观察，神经元的核较大，呈囊泡状，居细胞中央，核内有染色较深的核仁。　　（4）结缔组织　　1）透明软骨（猫的气管横切片）：肉眼观察，气管壁内染色略深的“C”形结构即透明软骨，将该部位置于显微镜视野中央。　　低倍镜观察，透明软骨表面包有一层致密结缔组织的软骨膜。近软骨膜的软骨细胞较小而密，梭形，单个排列，其长轴与软骨膜平行。软骨中心部分的软骨细胞较大，呈椭圆形或圆形，常2~4个成群分布。由软骨表面至软骨中心有质地均匀的基质。高倍镜观察，有软骨细胞存在的地方称为陷窝。在制片过程中有的软骨细胞脱落，则软骨陷窝呈现为白色空腔；有的软骨细胞有所收缩，其周围的白色间隙也是陷窝的一部分，陷窝周围的基质着色略深，称为软骨囊（图1-7）。　　图1-7 透明软骨（黄诗笺，2006）　　2）骨组织（长骨横切面磨片）：低倍镜观察，可见许多骨板呈多层同心圆排列的结构，即骨单位（哈佛氏系统）。每个骨单位的中央有一个黑色、较大的圆形管道的横断面即为中央管（哈佛氏管），在此管周围有许多呈同心圆排列的骨单位骨板（哈佛氏骨板）。各哈佛氏系统之间还存在着一些不呈同心圆排列的骨板，即间骨板。高倍镜观察，在骨板内或骨板间有许多扁卵圆形呈黑角的小腔隙，即骨陷窝，其内的骨细胞已不存在，骨陷窝向四周发出许多细小放射状的黑色分支即骨小管，相邻骨陷窝之间的骨小管彼此相连通，靠近哈佛氏管的骨小管则与哈佛氏管相连通（图1-8）。　　图1-8 哈佛氏系统横断面，示骨板（黄诗笺，2006）　　3）疏松结缔组织：低倍镜观察，可见交织成网的纤维及分布在纤维之间的结缔组织细胞。高倍镜下观察，胶原纤维为粉红色粗细不等的细带状，它们相互交叉排列，数量较多，有时胶原纤维呈波浪状。弹性纤维为深紫褐色，其断端常呈现卷曲状，纤维粗细不等，比胶原纤维细，单条分布而不成束，有分支并交织成网。成纤维细胞数量*多，胞体大，呈多突扁平形，染色浅，轮廓不明显，核多为椭圆形，蓝紫色，可见1或2个核仁。巨噬细胞形状不一，与成纤维细胞的区别在于细胞质中含有吞噬的台盼蓝颗粒，细胞轮廓较明显，核较小，圆形或卵圆形。肥大细胞常成群分布在毛细血管附近，胞体较大，圆形或卵圆形，细胞质中充满粗大的蓝紫色颗粒，核小，圆形或椭圆形，位于细胞中央。浆细胞数量少，很难在铺片上见到，呈椭圆形，核染色深，居细胞一侧，核内含有丰富的染色质，聚集在核周围，向核中心辐射状排列，近核处有一着色浅的区域（图1-9）。　　图1-9 疏松结缔组织（黄诗笺，2006）