(教材)医学寄生虫学实验教程(第4版)

第1篇实验总则 General Principles for Experiments 实验是医学寄生虫学教学的重要组成部分，主要为验证性实验。通过实验可以巩固和加深对理论知识的理解，熟悉和掌握寄生虫的形态结构，训练学生的寄生虫学基本实验技能，掌握实验观察的基本方法，培养实事求是的科学态度和独立工作的能力，为后续课程的学习和临床应用打下坚实的基础。 第1单元实验规则与方法Rules and methods for experiments 一、实验室规则与注意事项 Rules and precautions for laboratory 实验室是供学生开展实验的重要场所。在实验室内，学生通过实物观察和技术操作，进一步理解、巩固和掌握理论课内容，掌握寄生虫检验、鉴定等基本技能。学生必须遵守实验室的有关规章制度。 (1)每位学生必须严格遵守实验室规则。不得迟到、早退或无故缺课，生病或有事应向任课教师请假。 (2)在实验室内不做与实验无关的事情。应保持肃静，保证实验室的良好秩序。实验过程中如有问题，应举手后再询问，不得高声呼叫、喧哗或随意走动。 (3)实验前，要认真检查所用器材、标本等是否完好、齐全，如有缺损应及时向教师报告，不得随意调换仪器、标本等。 (4)操作时，按实验教程逐项进行。仔细观察标本，做好记录，充分了解标本的特点。肉眼观察的大体示教标本，不要随意移动。镜下示教标本，只在必要时，调节光源和细调焦钮，以免所示标本移位，影响其他学生观察。 (5)注意节约，爱护仪器和设备，不得随意摆弄室内仪器设备。爱惜标本，标本损坏应及时报告。 (6)注意安全，保护环境。使用危险品或感染性病原体时，应严格按照操作规程进行，并注意防护。严禁随意丢弃感染性病原体或含有病原体的物品、动物尸体及排泄物等。 (7)保持实验室整洁，禁止随地吐痰、禁止吸烟、禁止饮食。实验完毕后，应将实验台收拾整洁，检查标本、器材，并按原位放好或送还标本室，如有遗失或损坏，应及时报告教师。每次实验结束，值日学生应做好实验室清洁，关好门、窗，断水、断电后再离开。 (8)发生事故，应及时报告。发生重大事故时，应及时抢救受伤人员，尽力阻止事故扩大，并保护好事故现场。 二、实验的进行程序与要求Experimental procedures and requirements (1)预习：在课前，应认真预习实验教程以及教材的有关内容，必须对该次实验的内容、目的与要求、操作方法有一定的了解。 (2)观看影像：一般在每次实验开始，先观看影像资料。这些珍贵的影像资料不仅使学生概括了解实验内容，更重要的是可直观地看到寄生虫病发生的现场和活体寄生虫。 (3)讲解：一般由教师对该次实验内容的安排及注意事项进行讲解，让学生有充分的时间按实验教程的要求进行独立操作与观察。 (4)操作与观察：由学生独立进行操作和观察。在实验中要按实验教程认真操作，仔细观察，做好记录。有关基本技能的训练，要按操作程序反复练习，以达到一定的熟练程度。 (5)示教：多数实验将一些少见的寄生虫标本和病理标本作为示教，其目的是使学生在实验课有限的时间内有获得更多学习知识的机会。 (6)实验报告：实验报告必须强调科学性，实事求是地记录、绘制。在实验结束时，由学习委员将实验报告按学号排序，呈交教师。学生应认真阅读教师批改的实验报告，不断提高实验质量。 (7)小结：实验结束时，由师生共同总结本次实验的主要收获，以及今后应注意的问题。 三、光学显微镜的使用与维护Use and maintenance of optical microscope 1.普通光学显微镜的结构 普通光学显微镜由机械部分、照明部分和光学部分组成，其主要结构和部件名称参见图1-1。 2.低倍镜的使用方法 (1)检查：右手握紧镜臂，左手托住底盘，轻轻放在实验桌上。先检查显微镜各部件有无缺损，如发现有损坏或性能不良者，立即报告教师请求处理。 (2)准备：将显微镜放于操作者前方略偏左侧，转动粗调焦钮，将载物台下降（或镜筒升高），使物镜与载物台的距离拉开。再转动物镜转换器，将低倍镜对准载物台中央的通光孔（可听到“咔嗒”声）。 图1-1光学显微镜结构示意图 (3)对光：打开光圈，上升聚光器，双眼向目镜内观察，同时调节反光镜的方向（电光源显微镜无反光镜，应调节亮度调节柄），直到视野内光线明亮均匀为止。反光镜的平面镜易把其他景物映人视野，一般用凹面镜对光。 (4)放玻片标本：玻片标本的盖玻片向上，将玻片标本放在载物台前方，然后推至物镜下，用压片夹压住，或用弹簧夹夹住，然后把需要观察的部分移到通光孔的正中央。 (5)调节焦距：从显微镜侧面注视物镜镜头，同时转动粗调焦钮，使载物台缓慢上升（或镜筒下降），当低倍镜镜头与玻片之间的距离约5mm时，从目镜里观察视野，左手慢慢转动粗调焦钮，直至视野中出现物像为止。如物像不太清晰，可转动细调焦钮，使物像更加清晰。调节焦距时，要认清物镜的放大倍数，不同放大倍数物镜的工作距离不同（图1-2）。 图1-2三种物镜及其工作距离 如果按上述操作步骤仍看不到物像，可能由以下原因造成： 1)转动调焦钮太快，超过焦点，应按上述步骤重新调节焦距。 2)物镜没有对正，重新对正后再观察。 3)标本没有放到视野内，应移动标本片，寻找观察对象。 4)光线太强，尤其观察比较透明的标本或没有染色的标本时，易出现此现象，应将光线略调暗一些，再观察。在调节光线时，应重视聚光器的重要作用。一般来说，所用物镜的放大倍数越小，聚光器的位置越低。 3.高倍镜的使用方法 (1)依照上述操作步骤，先用低倍镜找到清晰物像。 (2)将需要观察的部分移到视野中央。 (3)从侧面注视物镜，用手移动物镜转换器，换为高倍镜。 (4)双眼向目镜内观察，同时微微转动细调焦钮，直至视野内出现清晰的物像为止。 按上述操作仍看不到物像时，可能由下列原因造成： 1)需要观察的部分不在视野内，应在低倍镜下寻找到观察目标后，移到视野中央，再换高倍镜观察。 2)标本片放反了（玻片的物面应向上），应把标本片放正后，再按上述步骤操作。 3)焦距调节不准确，应仔细调节焦距。 有的显微镜的高倍镜与低倍镜不配套，从低倍镜转换至高倍镜时，往往转不过来或撞坏标本（物镜松动时，也有此现象），如遇到此情况，可把载物台略微下降（或镜筒略微升高），直接用高倍镜调焦。方法是：从侧面注视物镜，转动粗调焦钮，使高倍镜镜头下降至与玻片*短距离，再观察目镜视野，慢慢转动细调焦钮，使镜头缓缓上升，直至物像清晰为止。 如需要更换标本时，应先将载物台下降(或镜筒升高），然后把标本片移到载物台前方，再拨开压片夹，取出玻片。 4.油镜的使用方法 (1)先按低倍镜—高倍镜的操作步骤，找到清晰的物像，把需要放大观察的部分移到视野中央。调节聚光器上升到*高处，光圈调大。 (2)将高倍镜移开，在玻片标本的镜检部位滴1滴香柏油（或液体石蜡），从侧面注视镜头，轻轻转换油镜，使镜面浸在油滴中。一般情况下，转过油镜后微微转动细调焦钮，即可看清物像。如仍不清晰，应按上述步骤重新操作。 (3)油镜使用完毕后，下降载物台（或上升物镜）约10mm，把物镜转到一边，用擦镜纸把镜头擦净。油镜的正确擦拭方法是：先用干净的擦镜纸（通常用双层）擦去镜头上的香柏油，再用蘸取少许二甲苯（或乙醚：乙醇为7：3的混合液）的擦镜纸轻擦，*后用干净的擦镜纸擦1~2次除去二甲苯。 (4)封加盖玻片的玻片标本的擦拭方法同油镜。无盖玻片的玻片标本，可采用拉纸法擦拭。方法是：先用1小块擦镜纸覆盖在标本片的油滴上，再滴1滴二甲苯，平拉擦镜纸（切忌用力擦拭），反复几次即可擦净。 5.显微镜使用的注意事项及维护 (1)取显微镜时必须右手握紧镜臂，左手托底盘。切勿一手斜提、前后摆动，以防镜头或其他零件跌落。 (2)观察标本时，显微镜距实验台边缘应保持一定距离（约5cm)，以免显微镜翻倒落地。 (3)使用时应严格按步骤操作，熟悉显微镜各部件性能，掌握粗、细调焦钮的转动方向与载物台或物镜的关系。转动粗调焦钮时，眼睛必须注视物镜的镜头。 (4)观察带有液体的临时标本时要加盖玻片，应将显微镜充分放平，以免液体污染镜头和显微镜。 (5)粗、细调焦钮要配合使用，细调焦钮不能单方向过度旋转。调节焦距时，要从侧面注视物镜下降，以免压坏标本和损坏镜头。 (6)用单筒显微镜观察标本时，应双眼同时睁开，左眼观察物像，右眼用以绘图。左手调节焦距，右手移动标本或绘图。 (7)禁止随意拧开或调换目镜、物镜和聚光器等零件。 (8)显微镜的光学部件不可用手指、纱布、手帕或其他粗糙物擦拭，以免磨损镜面。需要时只能使用擦镜纸擦拭。 (9)凡有腐蚀性和挥发性的化学试剂和药品，如碘、乙醇溶液、酸类、碱类等都不可与显微镜接触，如不慎污染时，应立即擦干净。 (10)实验完毕，应将标本片取出，用擦镜纸将镜头擦拭干净后移开（通常转换4X物镜于镜下），不能与通光孔相对（把物镜转离聚光器上方）。将电源线收好，放回镜箱。切不可把显微镜放在直射光线下暴晒。 四、显微测微尺的使用Use of microscope micrometer 1.显微测微尺的组成 寄生虫大小的测定，一般使用显微测微尺。显微测微尺由目镜测微尺（ocular micrometer）和镜台测微尺（stage micrometer）组成（图 1-3）。 (1)目镜测微尺：简称目微尺，是1块直径20mm的圆形玻璃片。它上面有直线刻度或网格式标尺。网格式的目微尺可用来测量物体的体积。 (2)镜台测微尺：简称台微尺，是1块特制的载玻片。其中央镶有1个刻度标尺，全长1mm，共划分成10个大格，每个大格又分成10个小格，共100个小格，每个小格长0.01mm(10—)，在标尺的外围有1个黑色环，利于找到标尺的位置。 2.显微测微尺的使用 (1)测微尺的安放：使用目微尺时，先将目镜从镜筒中抽出，旋去接目透镜，然后将目微尺安放在目镜的光阑上。注意应将目微尺有刻度的一面朝下，再将接目透镜旋上，把目镜插人镜筒，即可进行测量（图1-3）。 (2)测微尺的标定：在测量标本的长度之前，必须首先对目微尺在不同放大倍数的物镜下进行标定。 图1-3显微测微尺结构示意图 目微尺的标定方法:将台微尺夹于载物台上，调节焦距直至能看到台微尺刻度。此时，目微尺和台微尺同时显示在视野中，转动目镜，使目微尺的标尺直线与台微尺的标尺直线尽量靠近、平行，*终使两直线重合，再移动台微尺，使两个微尺的左侧端平齐，然后从左到右找出两个微尺的另一侧重合的直线（图1-4）。 图1-4显微测微尺标定示意图 分别计数重合线之间台微尺和目微尺各自包含的小格数，根据公式计算出目微尺每个小格的长度（格值），公式如下： 公式中“10”表示台微尺每个小格长10降。 例如，目微尺的第33格正好与台微尺的第22格重合，代人公式 为减少测量误差，应对目微尺的格数值测量3次，取其平均值。如果更换不同放大倍数的物镜，必须重新标定目微尺，才能再次测量。 (3)标本的测量与体积计算：测量时，取下台微尺，换上标本片，记录被测标本占目微尺的格数，然后乘以每个小格代表的长度。 例如，当用低倍镜测出某