分子生物学实验技术

章 CRISPR/Cas9技术 1概述 1实验1-1 小向导RNA（sgRNA）设计与载体构建 5实验1-2 重组质粒的转化和单克隆筛选鉴定 14实验1-3 重组质粒抽提和鉴定 17实验1-4 细胞转染及阳性克隆鉴定 18实验1-5 基因编辑效率检测 21实验1-6 逆转录定量PCR（RT-qPCR）检测目标基因表达 24实验1-7 蛋白质印迹法（Western blotting）检测目标蛋白的表达 28第二章 基因转录调控分析 31概述 31实验2-1 双萤光素酶报告基因检测 36实验2-2 染色质免疫沉淀PCR（ChIP-PCR） 40实验2-3 染色质免疫沉淀测序（ChIP-seq） 43实验2-4 靶标的切割和标记（CUT&Tag）实验 44实验2-5 甲醛辅助鉴定调控元件技术 47实验2-6 单细胞ATAC-seq 49实验2-7 重亚硫酸盐全基因组甲基化测序 50第三章 非编码RNA分析 53概述 53实验3-1 长非编码RNA（lncRNA）靶基因预测及功能分析 59实验3-2 利用在线工具对某一环状RNA（circRNA）进行初步分析 66实验3-3 circRNA的RT-qPCR检测 71实验3-4 circRNA过表达及验证 74第四章 单细胞技术 78概述 78实验4-1 视网膜单细胞悬液制备 84第五章 蛋白质-蛋白质相互作用分析 87概述 87实验5-1 酵母双杂交 98实验5-2 拉下（pull-down）实验 101实验5-3 免疫共沉淀 103实验5-4 荧光共振能量转移 106第六章 定点诱变与蛋白质翻译后修饰 108概述 108实验6-1 PCR 介导的快速定点诱变 113实验6-2 蛋白质小分子泛素相关修饰物蛋白（SUMO）化位点鉴定 115实验6-3 蛋白质泛素化检测——变性免疫沉淀法 116实验6-4 蛋白质泛素化检测——镍NTA 亲和层析法 117实验6-5 蛋白质泛素化检测——体内TUBEs 法119实验6-6 蛋白质泛素化检测——体外检测法 120第七章 基本生物信息在线工具的使用 122概述 122实验7-1 GEO 数据下载及差异基因分析 123实验7-2 利用在线工具对差异基因进行聚类分析 131实验7-3 蛋白质相互作用网络的构建和hub基因筛选 132