基于活化蛋白C和凝血酶的内皮细胞作用机制研究

第1章 绪论 1.1 止血机制 1.1.1 初级止血 1.1.2 二级止血 1.1.3 凝血过程的调节 1.1.4 纤维蛋白溶解 1.2 凝血酶及其多种功能 1.2.1 凝血酶的结构 1.2.2 凝血过程中的凝血酶功能 1.2.3 蛋白酶活化受体 1.2.4 凝血酶在细胞信号传导中的作用 l.3 蛋白C及其多种功能 1.3.1 蛋白C的结构 1.3.2 蛋白C的激活 l.3.3 APC的抗凝功能 1.3.4 APC的细胞保护途径 l.3.5 抗凝血和细胞保护性质的分离 1.4 炎症和凝血 1.4.1 炎症概述 1.4.2 炎症激活凝血反应 1.4.3 凝血影响炎症 1.5 蛋白激酶C 1.5.1 PKC的结构和活化 1.5.2 PKc的功能 1.6 本书的主要工作 第2章 研究方法 2.1 人类蛋白c变异体的制备 2.1.1 构建野生型蛋白C载体 2.1.2 点突变的蛋白C突变体 2.1.3 XL10-Gold超感受态细胞的转化 2.1.4 质粒小规模纯化和突变验证 2.1.5 质粒大规模纯化和定量 2.1.6 菌群保存 2.2 重组人类蛋白C的表达 2.2.1 细胞培养 2.2.2 HEK 293细胞的稳定转染 2.2.3 细胞系的冷冻保存和复苏 2.2.4 蛋白C表达和收集 2.3 蛋白C纯化 2.3.1 阴离子交换色谱纯化蛋白C 2.3.2 纯化蛋白C的分析 2.4 .蛋白C变异体的主要特性鉴定 2.4.1 蛋白c酶联免疫吸附测定(ELISA) 2.4.2 使用BCA蛋白质测定评估总蛋白质含量 2.4.3 蛋白C激活 2.4.4 使用S2366测定法定量化活化蛋白C(APC) 2.4.5 “APC ELISA”测定蛋白C激活效率 2.5 校准的自动血栓造影(CAT)检测 2.5.1 CAT检测原理 2.5.2 正常混合贫血小板血浆的制备