桃CBF和ICE转录因子基因克隆与功能分析

**章 文献综述**节 植物抗逆性及研究意义一、逆境与植物抗逆性二、研究植物抗逆性的意义第二节 低温胁迫对植物的影响及研究意义一、低温胁迫二、低温胁迫对植物生长发育的影响第三节 植物的抗寒机理及研究进展一、冷驯化（cold acclimation）二、膜结构的稳定与抗寒性三、渗透调节物质四、植物的抗氧化保护系统五、细胞酶系六、冷诱导基因（COR）第四节 植物抗寒基因与抗寒性改良的研究一、编码功能性蛋白的基因二、编码调控性蛋白的基因三、CBF和ICE转录因子基因对植物抗寒性的改良第五节 桃的冷害和抗冷性研究一、桃概述二、低温对桃树生长发育的影响第六节 本研究的目的和意义第二章 桃CBF和ICE转录因子基因的克隆和序列分析**节 引言第二节 试验材料、试剂和仪器一、试验材料二、试验所需的菌株、载体和感受态细胞三、主要化学试剂四、主要仪器设备第三节 试验方法一、桃基因组DNA和总RNA的提取与检测二、PCR扩增及其产物的检测三、目的片段的回收与检测四、克隆片段的连接和转化及测序五、CBF基因的酵母单杂交第四节 结果与分析一、桃基因组DNA和总RNA的检测结果二、桃CBF基因和ICE基因的克隆三、桃树CBF基因的生物信息学分析四、桃ICE基因的信息学分析五、酵母单杂交第五节 小结与讨论一、桃的核酸提取二、CBF和ICE基因的克隆三、CBF基因的序列分析四、ICE基因的序列分析五、酵母单杂交第三章 桃CBF和ICE基因的烟草转化**节 引言第二节 试验材料与仪器一、试验材料二、主要化学试剂三、主要仪器设备第三节 试验方法一、P3301.PpCBF和UN.ICE表达载体构建二、农杆菌工程菌的获得与鉴定三、表达载体对烟草的转化第四节 结果与分析一、表达载体的构建二、过表达转桃CBF基因、ICE基因烟草的创制第五节 小结一、外源基因转入不同物种所需载体不同，不同基因转入同一物种也存在过表达载体的选择问题二、转基因过程中的污染问题第四章 转桃CBF基因烟草耐逆性分析**节 引言第二节 试验材料和仪器一、试验材料二、主要化学试剂三、主要仪器设备第三节 试验方法一、转CBF基因烟草的分子鉴定二、转CBF基因烟草苗期抗逆性研究三、转CBF基因烟草苗期与抗性相关的生理生化指标的检测第四节 结果与分析一、过表达CBF转基因烟草的分子鉴定结果二、转CBF基因烟草阳性植株的逆境胁迫结果第五节 小结与讨论一、转CBF基因烟草的分子鉴定二、转桃CBF基因与非转基因烟草植株在逆境胁迫下的表型变化三、转桃CBF基因比非转基因烟草植株矮小四、转桃CBF基因与对照株在逆境胁迫下的丙二醛和电导度变化五、转桃CBF基因与非转基因烟草植株在逆境胁迫下的SOD酶和POD酶活性变化六、转桃CBF基因与非转基因烟草植株在逆境胁迫下的可溶性糖和脯氨酸含量的变化第五章 转CBF基因烟草的FAD和ERDB两基因的表达分析**节 引言第二节 试验材料和仪器一、试验材料二、主要化学试剂和仪器第三节 试验方法一、不同处理下烟草叶片的总RNA提取二、RNA的质量检测与RT-PCR三、FAD和ERDB两基因在逆境下的应答表达分析第四节 结果与分析一、低温胁迫下转CBF基因烟草与非转基因烟草的FAD和ERDB基因的表达二、干旱胁迫下转CBF基因烟草与非转基因烟草的FAD和ERDB基因的表达三、盐胁迫下转CBF基因烟草与非转基因烟草的FAD和ERDB基因的表达第五节 小结与讨论第六章 研究结果与展望参考文献 附录附录一 本实验所需培养基的配方附录二 试验中所用的引物及序列附录三 pCMBLA3301.CBF表达载体的构建图谱附录四 UN.ICE表达载体的构建图谱附录五 转基因烟草转化过程附录六 冷胁迫下转CBF基因植株与非转基因植株的表型变化附录七 干旱胁迫下转CBF基因植株与非转基因植株的表型变化缩略词表