发酵工程实验技术-第三版

**章 发酵微生物实验基本操作
**节 菌种保藏
一、菌种保藏意义
二、操作方法
三、菌种保藏管理
四、国内外主要菌种保藏中心介绍
第二节 接种技术与种子扩大培养
一、接种技术
二、种子扩大培养
三、种子扩大培养的实例
第三节 实验室无菌操作技术
一、概述
二、实验室常用的灭菌方法及操作

第二章 工业微生物核酸分离纯化
**节 工业微生物核酸分离纯化的基本原理
一、细胞裂解
二、大肠杆菌基因组DNA的分离纯化
三、大肠杆菌质粒DNA的分离纯化
四、酿酒酵母基因组DNA的分离纯化
五、酿酒酵母质粒DNA的分离纯化
六、酿酒酵母RNA的分离纯化
七、黑曲霉DNA的分离纯化
八、黑曲霉RNA的分离纯化
第二节 引物设计与PCR实验操作
一、引物设计原理
二、引物设计的常用软件（Primer Premier）介绍
三、从大肠杆菌基因组DNA中扩增得到己糖激酶基因
第三节 感受态制备与转化
一、大肠杆菌氯化钙法感受态制备与转化
二、大肠杆菌高效化学法感受态制备与转化（TSS法）
三、大肠杆菌电转化法感受态制备与转化
四、枯草杆菌感受态细胞的制备与转化
五、化学转化酿酒酵母感受态的制备
六、电转化酿酒酵母感受态的制备
第四节 载体的构建与验证
一、TA克隆
二、质粒载体的酶切与纯化
三、PCR片段的酶切与回收
四、载体与PCR片段的连接与转化
五、转化子的检测
第五节 基于同源重组的基因敲除技术
一、基因敲除技术的原理
二、敲除大肠杆菌中的蛋白酶基因
三、敲除酿酒酵母中的精氨酸转运基因
四、杆菌中实现基因多次重复敲除
五、酿酒酵母中实现基因多次重复敲除

第三章 发酵过程基本操作
**节 生物反应器及其分类
第二节 分批发酵技术
实验3．1 摇瓶与分批发酵
实验3．2 10L发酵罐与分批发酵
实验3．3 L-乳酸5L发酵罐发酵实验
第三节 补料分批培养操作技术
一、补料分批培养的流加方式及控制理论
二、补料的内容、原则及措施
实验3．4 酵母流加培养控制实验
实验3．5 耐高渗透压假丝酵母分批补料工艺发酵生产甘油
第四节 连续培养操作技术
实验3．6 面包酵母的连续培养
实验3．7 大肠杆菌的连续培养
实验3．8 杂交瘤细胞的连续培养

第四章 发酵产品提取精制基本操作
**节 发酵液预处理技术
一、固态物料预处理
二、液态物料预处理
三、预处理絮凝步骤优化实例
第二节 固液分离技术
一、过滤分离
实验4．1 实验室转鼓真空过滤机简易使用方法
二、离心沉降分离
三、超离心技术
实验4．2 实验室台式高速冷冻离心机使用方法
第三节 细胞破碎技术
一、细胞壁的组成与结构
二、常用破碎方法和操作步骤
三、破碎率的测定
实验4．3 酵母细胞的超声波破碎及破碎率的测定
实验4．4 酶法破碎裂殖壶菌提取胞内油脂
第四节 常规提取技术
一、萃取
二、吸附
实验4．5 用萃取法从天然植物茶叶中提取茶多酚
实验4．6 双水相萃取分离提取猪心中的细胞色素
实验4．7 CTAB反微团萃取大豆蛋白
实验4．8 超临界CO2萃取茶叶中咖啡碱
实验4．9 大孔树脂吸附柱层析分离葡萄红色素
第五节 产品精制技术
一、发酵产物的精制
二、发酵产物的成品加工
实验4．10 链霉素的分离纯化
实验4．11 离子交换法制备?-氨基丁酸
实验4．12 发酵法制备维生素B2

第五章 典型发酵产品实验
实验5．1 碱性果胶酶的发酵生产
实验5．2 异亮氨酸的发酵生产
实验5．3 柠檬酸的发酵生产
实验5．4 透明质酸的发酵生产
实验5．5 啤酒的发酵生产
实验5．6 氨基葡萄糖重组大肠杆菌的构建及条件优化
参考文献