合成生物学基础实验原理与技术:大肠杆菌篇(牛福星)

**章　感受态细胞的快速制备及转化 001**节　感受态细胞的化学法快速制备 003一、实验目的 003二、实验原理 003三、实验材料、试剂与设备 004四、实验流程 004五、注意事项 005六、思考题 005第二节　利用热激法制备的感受态细胞进行转化 006一、实验目的 006二、实验原理 006三、实验材料、试剂与设备 007四、实验流程 007五、注意事项 007**章　感受态细胞的快速制备及转化 001**节　感受态细胞的化学法快速制备 003一、实验目的 003二、实验原理 003三、实验材料、试剂与设备 004四、实验流程 004五、注意事项 005六、思考题 005第二节　利用热激法制备的感受态细胞进行转化 006一、实验目的 006二、实验原理 006三、实验材料、试剂与设备 007四、实验流程 007五、注意事项 007六、思考题 008第三节　感受态细胞的电转化法快速制备 009一、实验目的 009二、实验原理 009三、实验材料、试剂与设备 009四、实验流程 010五、注意事项 010六、思考题 011第四节　利用电转化法制备的感受态细胞进行转化 012一、实验目的 012二、实验原理 012三、实验材料、试剂与设备 013四、实验流程 013五、注意事项 013六、思考题 014 第二章　PCR 扩增及琼脂糖凝胶核酸电泳技术 015**节　常规PCR 技术 017一、实验目的 017二、实验原理 017三、实验材料、试剂与设备 017四、实验流程 019五、注意事项 019六、思考题 020第二节　重叠延伸PCR 技术 021一、实验目的 021二、实验原理 021三、实验材料、试剂与设备 021四、实验流程 023五、注意事项 023六、思考题 024第三节　定点突变PCR 技术 025一、实验目的 025二、实验原理 025三、实验材料、试剂与设备 025四、实验流程 026五、注意事项 027六、思考题 028第四节　琼脂糖凝胶核酸电泳技术 029一、实验目的 029二、实验原理 029三、实验材料、试剂与设备 029四、实验流程 030五、注意事项 031六、思考题 032 第三章　DNA 提取 033**节　大肠杆菌基因组的提取（机械破胞 柱法回收） 035一、实验目的 035二、实验原理 035三、实验材料、试剂与设备 036四、实验流程 036五、注意事项 037六、思考题 037第二节　质粒提取（碱裂解 柱回收法） 038一、实验目的 038二、实验原理 038三、实验材料、试剂与设备 039四、实验流程 039五、注意事项 040六、思考题 041第三节　PCR 产物回收（乙醇沉淀法） 042一、实验目的 042二、实验原理 042三、实验材料、试剂与设备 042四、实验流程 043五、注意事项 043六、思考题 043第四节　PCR 产物/ 酶切产物纯化（柱提法） 044一、实验目的 044二、实验原理 044三、实验材料、试剂与设备 044四、实验流程 045五、注意事项 046六、思考题 046 第四章　工具酶的使用以及载体构建 047**节　限制性核酸酶（DpnⅠ）的使用 050一、实验目的 050二、实验原理 050三、实验材料、试剂与设备 050四、实验流程 051五、注意事项 051六、思考题 052第二节　限制性核酸内切酶的使用 053一、实验目的 053二、实验原理 053三、实验材料、试剂与设备 053四、实验流程 054五、注意事项 055六、思考题 055第三节　连接酶的使用 056一、实验目的 056二、实验原理 056三、实验材料、试剂与设备 056四、实验流程 057五、注意事项 057六、思考题 059第四节　T 载体构建 060一、实验目的 060二、实验原理 060三、实验材料、试剂与设备 061四、实验流程 061五、注意事项 062六、思考题 062 第五章　阳性转化子的筛选与鉴定 063**节　菌落PCR 鉴定 065一、实验目的 065二、实验原理 065三、实验材料、试剂与设备 065四、实验流程 066五、注意事项 067六、思考题 067第二节　基于蓝白斑筛选的载体构建 068一、实验目的 068二、实验原理 068三、实验材料、试剂与设备 068四、实验流程 069五、注意事项 070六、思考题 070第三节　基于荧光蛋白报告基因的载体构建和鉴定 071一、实验目的 071二、实验原理 071三、实验材料、试剂与设备 071四、实验流程 072五、注意事项 072六、思考题 073第四节　选取载体的重鉴定 074一、实验目的 074二、实验原理 074三、实验材料、试剂与设备 074四、实验流程 075五、注意事项 076六、思考题 076 第六章　蛋白质表达纯化及鉴定 077**节　蛋白质表达 079一、实验目的 079二、实验原理 079三、实验材料、试剂与设备 079四、实验流程 080五、注意事项 080六、思考题 081第二节　细胞收集与破碎 082一、实验目的 082二、实验原理 082三、实验材料、试剂与设备 082四、实验流程 083五、注意事项 084六、思考题 084第三节　蛋白质纯化 085一、实验目的 085二、实验原理 085三、实验材料、试剂与设备 085四、实验流程 086五、注意事项 087六、思考题 088第四节　SDS-PAGE 电泳 089一、实验目的 089二、实验原理 089三、实验材料、试剂与设备 089四、实验流程 091五、注意事项 092六、思考题 093 第七章　CRISPR 技术应用 095**节　CRISPR 基因敲除 097一、实验目的 097二、实验原理 097三、实验材料、试剂与设备 097四、实验流程 100五、注意事项 102六、思考题 103第二节　CRISPR 基因敲除验证及质粒去除 104一、实验目的 104二、实验原理 104三、实验材料、试剂与设备 104四、实验流程 105五、注意事项 106六、思考题 107第三节　CRISPR 基因抑制 108一、实验目的 108二、实验原理 108三、实验材料、试剂与设备 108四、实验流程 109五、注意事项 110六、思考题 110第四节　CRISPR 基因激活 111一、实验目的 111二、实验原理 111三、实验材料、试剂与设备 112四、实验流程 112五、注意事项 113六、思考题 114 附录一　常用培养基配方 115 附录二　常用限制性内切酶 119 附录三　思考题参考答案 123 参考文献 139